[发明专利]离子交换和硅胶柱层析法分离制备汉防己甲、乙素的方法

摘要

离子交换和硅胶柱层析法分离制备汉防己甲、乙素的方法。汉防己是防己科千金藤属植物粉防己的干燥块根，其有效成分为汉防己碱，其中主要有效成分为汉防己甲素和乙素，汉防己碱具有抗心肌缺血、抗心率失常、降压、抗炎、抗矽肺、抗癌及镇痛等作用。药用时，对其纯度要求达到99%以上，提取纯化为限制二者药用的重要原因。当前，提取纯化汉防己甲素和乙素工艺，大量运用到剧毒且昂贵的氯仿，以及强碱等，氯仿对人和环境均有很大的毒害作用，另外对放大生产的设备腐蚀性强。此外，样品纯度不高，工艺过程复杂。在此现状上，本发明开发了，运用离子交换树脂和C18键合硅胶柱层析法，快速分离纯化制得高纯度的汉防己甲素和乙素，同时公开了一种利用乙醇进行重结晶纯化汉防己甲素和乙素的方法。本制备工艺没有运用任何有毒试剂，柱层析填料可重复利用，所用乙醇可回收利用。

主权项

1.离子交换和硅胶柱层析法分离制备汉防己甲、乙素的方法，其特征在于工艺步骤：1.提取：取干燥粉防己的根，粉碎，利用6‑10倍体积的80‑95%乙醇回流5‑8h，减压蒸馏回收乙醇，得流浸膏；2.过阳离子交换树脂：用盐酸混悬步骤1中所得流浸膏，并调整pH值至1‑7，过滤，取滤液加于阳离子交换树脂柱上进行上样后，先以5‑10BV去离子水和10%‑90%乙醇溶液进行洗脱除杂，再依次使用不同浓度的乙醇洗脱，具体为首先以5‑10BV 0.5‑1.5 mol/L 的氨水乙醇溶液洗脱，其中乙醇浓度为50%‑70%，再以5‑10BV 1.6‑2.5 mol/L 的氨水乙醇溶液洗脱，其中乙醇浓度为70%‑100%，最后用无水乙醇洗脱至无色，收集碱性乙醇洗脱液，脱盐后，过滤，用去离子水洗，得到汉防己碱粗提物；其中，所用阳离子交换树脂为001×7、001×4；混悬流浸膏的盐酸溶液，浓度为0.5 mol/L‑1.5 mol/L；使用的阳离子交换树脂的量为，阳离子交换树脂的体积(mL):流浸膏重量(g) =30‑50：1；滤液上样方式为反复吸附，采用逆流方式反复三次上样；碱性乙醇洗脱液为1.6‑2.5 mol/L 的氨水乙醇溶液，其中乙醇浓度为70%‑100%的洗脱液；脱盐方式为，用0.5‑2.0 mol/L 氨水调至pH值至6‑7，然后过滤；3.RP‑C18键合硅胶柱层析：用乙醇溶解步骤2所得汉防己碱粗品，混悬，用RP‑C18硅胶充分拌匀，加入RP‑C18键合硅胶柱中，洗脱剂洗脱，利用紫外检测器监测，监测波长为230nm，按照色谱峰进行接收，得汉防己甲素和汉防己乙素粗品；其中，乙醇为无水乙醇，用量为汉防己碱粗品重量的1‑1.5倍；拌样的RP‑C18硅胶为浸膏重量的0.5‑2倍；RP‑C18键合硅胶柱层析洗脱剂为体积分数0.01%‑0.03%的三乙胺水溶液和乙醇，二者比例为1:3至1:4；4.重结晶：将步骤3中，按照色谱峰接收的汉防己甲素和汉防己乙素粗品分离开；分别将二者减压回收溶剂，分别将各粗品，用固定比例乙醇溶解，加热至适当温度，使样品充分溶解，过滤，将滤液进行浓缩，静置，待析出结晶，洗净，烘干，即分别得纯度为99%以上的汉防己甲素和汉防己乙素；其中，溶解汉防己甲素和乙素的粗品乙醇溶液用量为，各粗品重量的10‑30倍；溶解汉防己甲素粗品的固定比例乙醇溶液，乙醇浓度为70%‑100%；溶解汉防己乙素粗品的固定比例乙醇溶液，乙醇浓度为70%‑100%；利用乙醇溶解汉防己甲素粗品的温度可30℃‑75℃；利用乙醇溶解汉防己乙素粗品的温度为30℃‑75℃；将滤液浓缩至原粗品质量的4‑10倍。