[发明专利]一种快速高效地在葡萄中瞬时转化基因的转化方法

摘要

本发明提供了一种快速高效地在葡萄中瞬时转化基因的转化方法。本发明将载有重组质粒的GV3101农杆菌菌株和p19菌株分别培养，等体积混合备用；选择5周龄的葡萄组培苗的植物组织，采用注射器法高压将菌液完全浸入植物组织；之后植物组织保持水分和透气；经黑暗培养和光照培养后，经检测即可用于后续实验。本发明将葡萄组培苗叶片直接置于注射器内，依靠注射器拉动带来的瞬时高压迅速的实现了农杆菌菌液的浸入，操作简单，同时减少了操作的时间，节省了人力物力和财力。另外这种方法还保证了叶片不会出现传统真空泵抽气制造高压时，由于抽气时间过长而造成的植物细胞膜破裂而引起细胞的死亡，极大地提高了转化的效率。

主权项

一种快速高效地在葡萄中瞬时转化基因的转化方法，其特征在于：所述转化方法包括以下步骤：（1）葡萄组培苗的培养：剥取葡萄的茎尖生长点，置于组培苗培养基中进行培养5周获得5周龄的葡萄组培苗；（2）侵染菌液的制备：将农杆菌菌株和p19菌株分别置于含抗生素的YEB液体培养基中进行恢复培养；将恢复培养后的菌液转移至含抗生素的YEB液体培养基中进行扩大培养；将扩培的菌液离心，去除上清液；将沉淀以悬浮液悬浮并培养菌液；然后将获得的农杆菌菌液与p19菌液等体积混匀后，摇匀得到混合菌液备用；（3）农杆菌对葡萄组培苗组织的侵染：从所述5周龄的葡萄组培苗中选择叶片，将叶片表面扎若干小孔，置于装有所述混合菌液的注射器中；封注射器口，迅速拉至最大刻度处，反复抽拉直至菌液完全浸入叶片，侵染后的叶子呈半透明状态；（4）农杆菌侵染后的培养：拭去葡萄叶片上残留的菌液，置于湿润的双层脱脂棉中，密封保持湿度，并扎小孔透气；经过培养获得转基因材料。