[发明专利]利用抑菌培养基培育茶树幼胚的组培方法

摘要

本发明涉及一种利用抑菌培养基培育茶树幼胚的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、分化培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的茶树幼胚抑菌组培过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了茶树幼胚组培技术环节，降低了茶树幼胚组培成本；而且操作简单，只需按不同的培养基配方配制后即可使用，实用性强，推广性好。本发明的茶树幼胚抑菌组培方法与常规的茶树幼胚组培方法相比，可以降低成本10％以上。

主权项

一种利用抑菌培养基培育茶树幼胚的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、分化培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为：MS+0.1～2mg/L 2,4‑D+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L环丝氨酸+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；分化培养基为：MS+1～3mg/L 6‑BA+0.1～0.5mg/L IBA+0.5～2mg/L GA3+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L环丝氨酸+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为：1/2MS+1～3mg/L IBA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L环丝氨酸+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌呤；所述GA3，指赤霉素；所述IBA，指α‑吲哚丁酸；所述2,4‑D，指2,4‑二氯苯氧乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固，备用；(3)无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；(4)诱导培养：采取未成熟的果实，用洗衣粉浸泡冲洗15min后，去除果壳，用体积比为75％酒精消毒30s，再用重量体积比为0.1％升汞浸泡消毒12min，无菌水反复冲洗不少于3次；消毒后的种子在无菌条件下剥开种壳，取出幼嫩的子叶型胚，接种于诱导培养基上，培养30d后长出各种类型的胚状体或愈伤组织；培养室温度为26℃，暗培养；(5)分化培养：将诱导出的出各种类型的胚状体或愈伤组织转入分化培养基中，30d后逐步分化出芽；多次继代培养可以获得更多的芽苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400Lx；(6)生根培养：取高度为3～5cm芽苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整植株；培养室温度为25℃，光照12h，光照强度为1500Lx；(7)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至透水性好的微酸性土壤中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃。