[发明专利]一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法

摘要

一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法，它涉及一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法。本发明的目的是提供一种不同来源的间充质干细胞向胰岛样细胞分化的方法，进而获得大量的胰岛样细胞。为实现上述目标，具体方法如下：1)脐带、胎盘或脂肪来源间充质干细胞的分离及原代培养；2)分化培养基的制备包括：制备脑组织条件培养基(BTCM)、细胞分化诱导液以及干细胞条件培养基(SCM)；3)三阶段诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化；4)获得的胰岛样细胞的鉴定。通过本方法获得胰岛样细胞成熟度高，较少的细胞数量即可达到快速降糖作用，具有广阔的应用前景，本发明应用于生物医学领域。

主权项

1.一种诱导间充质干细胞分化为胰岛样细胞的方法，其特征在于它按照以下步骤进行：/n一、从脐带、胎盘或脂肪组织中分离获得间充质干细胞，并传代培养；/n二、分化培养基制备/n所述的分化培养基包括脑组织条件培养基、细胞分化诱导液和干细胞条件培养基；/n所述的脑组织条件培养基制备过程如下：在无菌条件下，取出生6～7天大鼠的大脑，用PBS或盐水清洗后，1000rpm离心6min，弃上清，用10％FBS的DMEM高糖培养基重悬沉淀，将脑组织捣碎为单个细胞，收集脑组织细胞用10％FBS的DMEM高糖培养1d后，加入浓度为1～2μmol/L的阿糖胞苷培养，在培养的第5d收集培养液，即为BTCM；/n所述的细胞分化诱导液成分为：以DMEM/F12为基础培养基，内含2％FBS、10mmol/L尼克酰胺、β细胞调节素、Conophylline100μg/L；/n所述的干细胞条件培养基制备过程如下：用含2％FBS、10mmol/L尼克酰胺和2％B27的DMEM/F12培养基培养MSCs，3天后收集培养液即为SCM；/n三、将P3代脐带、胎盘或脂肪来源的间充质干细胞以4×10