[发明专利]一种骨骼或牙齿DNA磁珠提取方法和试剂

摘要

本发明公开了一种骨骼或牙齿DNA磁珠提取方法和试剂。试剂包括：0.2‑0.8M EDTA，0.3‑0.6％NLS，0.2‑0.5M EGTA，0.40‑0.70mg/ml PK，0.02‑0.05M DTT，35‑50％异丙醇，2.0‑4.0M盐酸胍，0.5‑1.5mg磁珠，5‑10mM氯化钙，70‑90％乙醇，0.5×TE。方法步骤：1.脱钙：30‑45℃处理检材；2.消化：45‑65℃裂解检材释放DNA；3.结合：室温结合DNA；4.洗涤：清洗磁珠；5.洗脱：室温或高温振荡洗脱DNA。该方法能高效地提取骨骼或牙齿DNA，满足定量定性、测序等实验及法医科学DNA分型与应用的要求。

主权项

1.一种骨骼和牙齿DNA磁珠提取方法和试剂，具体流程包括试剂配制和方法操作：(1)试剂配制：包括脱钙液、消化液、结合液、洗涤液和洗脱液的配制；(2)脱钙液A预处理，将用液氮处理后研磨成粉末的骨骼/牙齿样本，作为DNA提取样品。取陈旧骨骼/牙齿检材粉末样品置于离心管中，加入预处理液A，对骨骼/牙齿检材在30‑45℃条件下于旋转混合仪中避光进行脱钙预处理1.0‑2.0小时；(3)消化液B裂解，在避光45‑65℃条件下对样本进行消化裂解处理释放DNA；(4)结合液C结合DNA，避光室温条件下采用磁珠特异性吸附样本中的DNA；(5)洗涤，配置洗涤液W1和W2对吸附DNA的磁珠进行洗涤；(6)加入洗脱液T，在室温或高温作用下辅助洗脱，经过充分混合洗脱后，进行磁珠分离，然后用移液器吸取上清液体，此液体即为提取的骨骼/牙齿检材DNA，所述的物理强化作用为漩涡震荡、加热组合的方式。