[发明专利]一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的方法

摘要

本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的方法。该方法包括以下步骤(1)斜面培养；(2)种子培养；(3)发酵培养。本发明一方面改变发酵培养基中各营养组分发酵培养基中含有Tween‑80 0.1‑1g/ml％、NH4Cl 0.1‑1g/ml％、脲 0.01‑1g/ml％，并采用葡萄糖‑Co2+耦合补加工艺，添加葡萄糖和诱导剂IND二者配成的补料；另一方面控制细菌生长环境发酵过程中通过添加氨水将pH控制在6.8‑7.5，温度控制在25‑35℃，通氧量保持1‑3vvm，从而达到大幅度提高腈水合酶发酵生产中酶活性的目的。

主权项

一种提高枯草芽孢杆菌腈水合酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)斜面培养：将菌种接到灭过菌的斜面固体培养基中25‑35℃培养2‑6天，接入装液量为50ml的500ml带凹口三角摇瓶中，25‑35℃摇床培养24‑72h，摇床转速100‑300rpm，作为一级种子备用；(2)种子培养：将培养好的一级种子按5‑15％的接种量接入50ml的二级种子培养摇瓶中，25‑35℃摇床培养24‑72h，摇床转速100‑300rpm；(3)发酵培养：在5L发酵罐中加入2‑4L发酵培养基，121℃实罐消毒10‑30min，以5‑15％的接种量将200‑400ml种子液转入发酵罐内，在通气量1‑3vvm，罐压0.01‑0.1Mpa，搅拌转速100‑300rpm，温度25‑35℃的条件下，发酵周期72‑120h；在培养过程中，每隔2‑5h取样，测定菌体生长量、发酵液pH变化、葡萄糖含量以及酶活变化情况，控制pH值在6.8‑7.5，通过补加葡萄糖‑Co2+耦合溶液使其浓度保持在3～5g/L之间，当酶活出现降低时结束培养，收获菌体待用。