[发明专利]一种提高囊泡中水通道蛋白表达活性的方法及反渗透膜

摘要

本发明公开了一种提高囊泡中水通道蛋白表达活性的方法，该方法第一步包括水通道蛋白的磷酸化作用和磷脂囊泡体系溶液的制备；第二步为磷酸化水通道蛋白的引入。本发明还提供一种水通道蛋白反渗透膜，其采用上述的方法制得的磷酸化水通道蛋白囊泡制备得到。本发明通过水通道蛋白的磷酸化作用，提高了水通道蛋白的表达活性，再将该磷酸化修饰的水通道蛋白嵌入到囊泡中，应用于反渗透膜中，在达到同等水平水通量和脱盐率的情况下，所使用的水通道蛋白与囊泡的比例大大降低。

主权项

一种提高囊泡中水通道蛋白表达活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步，包括水通道蛋白的磷酸化作用和磷脂囊泡体系溶液的制备；其中，水通道蛋白的磷酸化作用方法如下：(1)移取0.5‑5mg/mL的水通道蛋白溶液于定量瓶中，分别加入10‑200mL的甘油，0.1mmol‑5mmol蛋白激酶，5‑15mmol磷酸基团供体剂，磷酸基团供体剂与水通道蛋白的摩尔比例为1∶20‑1∶200，用pH值为7.5的磷酸盐缓冲液标定至定量瓶刻度线，配制浓度为0.01‑0.5mg/mL的水通道蛋白储备溶液；；(2)抽取10‑100mL上述水通道蛋白储备溶液，滴加0.005‑0.1mol/L的氯化钙溶液0.1‑1mL，和/或滴加磷酸改变溶液的pH值为6‑7，和/或往溶液中通入0.5‑5mL氧气来激活蛋白激酶使水通道蛋白发生磷酸化作用；(3)在磷酸化的水通道蛋白溶液中加入去污剂，离心，去掉清液，留下蛋白质体，如此反复2‑4次；(4)保留离心得到的蛋白质体，溶于pH值为7.5的磷酸盐缓冲液中，置于‑20℃下冷冻避光保存；磷脂囊泡体系溶液的制备方法如下：将两亲脂质加入去离子水或磷酸缓冲溶液中，超声震荡，制备磷脂囊泡体系溶液，得到浓度为0.05‑4mg/mL的样品；第二步、磷酸化水通道蛋白的引入将第一步得到的水通道蛋白质体与配制好的磷脂囊泡体系溶液混合，加入体积浓度10％甘油1‑100mL，0.005‑0.1mg/mL n‑辛基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷0.05‑1mL，再将该混合液置于磷酸缓冲液中进行渗析，期间需更换磷酸缓冲液2‑5次，得到磷酸化水通道蛋白囊泡。