[发明专利]一种利用大肠杆菌系统制备小鹅瘟病毒样颗粒的方法有效
| 申请号： | 201710049003.8 | 申请日： | 2017-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN106754981B | 公开（公告）日： | 2020-06-09 |
| 发明（设计）人： | 曲光刚;沈志强;金婷婷;李书光;武曰星;王长江 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C12N15/35 | 分类号： | C12N15/35;C12N15/70;C12N7/04;C07K14/015;C07K16/08;A61K39/23;A61P31/20 |
| 代理公司： | 宁波甬致专利代理有限公司 33228 | 代理人： | 李迎春 |
| 地址： | 256600 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用大肠杆菌系统可溶性表达小鹅瘟VP2蛋白制备小鹅瘟病毒样颗粒方法，一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化，定点突变包括将密码子AGA突变为CGC和GGA突变为GGT,并克隆到pET‑Sumo载体上，构建重组表达载体pET‑Sumo‑VP2，并将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导，获得可溶性重组VP2重组蛋白；将重组蛋白用ULP酶酶切后通过Ni柱纯化得到纯化的VP2蛋白。电镜结果显示酶切后的VP2蛋白可形成小鹅瘟病毒样颗粒，并且纯化后的VP2蛋白具有良好的反应原性，可用于小鹅瘟病毒基因工程亚单位疫苗的制备。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 大肠杆菌 系统 制备 瘟病 颗粒 方法 | ||
【主权项】：
一种可溶性表达小鹅瘟病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，对鹅细小病毒VP2基因进行密码子优化得到优化后的VP2基因序列，扩增所述的优化后的VP2基因序列，并克隆到pET‑Sumo载体上，构建表达载体pET‑Sumo‑VP2，将pET‑Sumo‑VP2转化至原核表达菌，通过IPTG在37℃下诱导获得可溶性重组VP2蛋白，将重组VP2蛋白用ULP酶进行30℃酶切2 h,使VP2蛋白与Sumo标签分开，酶切后的蛋白用Ni柱纯化，可得到纯化的VP2蛋白，将纯化好的VP2蛋白透析到PBS中，通过电镜观察，该重组蛋白VP2可形成病毒样颗粒。
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