[发明专利]一种鸡常见细菌病的病原多重PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种鸡常见细菌病的病原多重PCR检测试剂盒，所述的试剂盒包括PCR反应液以及多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌这4种细菌的特异性引物，阳性对照（多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌标准品或多杀性巴氏杆菌KMT1基因、沙门氏菌invA基因、大肠杆菌O157:H7 rfbE基因和金黄色葡萄球菌nuc基因的阳性质粒），阴性对照（灭菌的无酶双蒸水）、DNA Marker。本发明运用四重PCR，能快速、准确、同步地检测4种病原菌，且敏感性好，特异性强，检测下限达到0.01ng/μL，准确率高达92.6%。

主权项

1.一种鸡常见细菌病的病原多重PCR检测试剂盒，包括PCR反应液、阳性对照、阴性对照、特异性引物及DNA Marker，其特征在于：所述的特异性引物为rfbE‑F 5′‑AACGGTTGCTCTTCATTTAG‑3′(SEQ ID NO.1)rfbE‑R 5′‑GAGACCATCCAATAAGTGTG‑3′(SEQ ID NO.2)invA‑F 5′‑TCATCGCACCGTCAAAGGAACC‑3′(SEQ ID NO.3)invA‑R 5′‑GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA‑3′(SEQ ID NO.4)KMT1‑F 5′‑ATCCGCTATTTACCCAGTGG‑3′(SEQ ID NO.5)KMT1‑R 5′‑GCTGTAAACGAACTCGCCAC‑3′(SEQ ID NO.6)nuc‑F 5′‑AGATAACGGCGTAAATAGAAGTGG‑3′(SEQ ID NO.7)nuc‑R 5′‑TGCACTTGCTTCAGGACCATA‑3′(SEQ ID NO.8)所述的阳性对照为：大肠杆菌O157：H7、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的标准品或大肠杆菌O157：H7 rfbE基因阳性质粒、沙门氏菌invA基因阳性质粒、多杀性巴氏杆菌KMT1基因阳性质粒、金黄色葡萄球菌nuc基因阳性质粒；所述的阴性对照为灭菌的无酶双蒸水。