[发明专利]一种同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定维生素K1的方法

摘要

本发明公开了一种同位素稀释超高效液相色谱质谱联用快速灵敏地测定维生素K1的方法，包括如下步骤(1)维生素K1对照品溶液和维生素K1同位素内标溶液配制；(2)建立维生素K1标准曲线；(3)采集待测样品溶液的色谱图；(4)待测样品中维生素K1浓度的确定。本发明的同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定维生素K1的方法用于血清中维生素K1的测定时，简单快速、准确度高、专属性强、精密度高、灵敏度好。

主权项

一种同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定维生素K1的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：S1：配制维生素K1对照品溶液和维生素K1同位素内标溶液的步骤；用甲醇分别溶解维生素K1和维生素K1同位素内标，制成已知浓度的维生素K1对照品储备液和已知浓度的维生素K1同位素内标储备液；用甲醇将维生素K1对照品储备液和维生素K1同位素内标储备液分别稀释成一系列具有不同已知浓度的维生素K1对照品溶液和已知浓度的维生素K1同位素内标溶液；S2：建立维生素K1标准曲线的步骤：分别吸取一定体积的具有不同已知浓度的维生素K1对照品溶液，加入1～5倍体积的维生素K1同位素内标溶液，涡旋混匀，加入1～10倍体积的萃取溶液，涡旋混匀，离心，取一定体积的上清液，室温下氮气吹干，加入一定体积的复溶剂，涡旋混匀，离心，得到一系列具有不同已知浓度的维生素K1标准曲线工作液；在相同的超高效液相色谱质谱条件下，将一定体积的具有不同已知浓度的维生素K1标准曲线工作液分别注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得一系列具有不同已知浓度的维生素K1标准曲线工作液的色谱图；以维生素K1标准曲线工作液的色谱图中维生素K1色谱峰峰面积与维生素K1同位素内标色谱峰峰面积的比值为纵坐标或横坐标，以相应的维生素K1标准曲线工作液的维生素K1浓度为横坐标或纵坐标，建立维生素K1标准曲线；S3：采集待测样品溶液的色谱图的步骤；吸取一定体积的待测样品，加入1～5倍体积的维生素K1同位素内标溶液，涡旋混匀，加入1～10倍体积的萃取溶液，涡旋混匀，离心，取一定体积的上清液，室温下氮气吹干，加入一定体积的复溶剂，涡旋混匀，离心，得待测样品溶液；在与S2步骤中相同的超高效液相色谱质谱条件下，取一定体积的待测样品溶液注入超高效液相色谱质谱联用仪中，获得待测样品溶液的色谱图；S4：计算待测样品中维生素K1浓度的步骤；将待测样品溶液色谱图中维生素K1色谱峰峰面积与维生素K1同位素内标色谱峰峰面积的比值带入已建立的维生素K1标准曲线，计算出待测样品中维生素K1的浓度。