[发明专利]一种石斛的组培育苗方法

摘要

一种石斛的组培育苗方法，涉及中药石斛的培育繁殖技术领域。步骤如下外植体处理、诱导培养、继代增殖、生根培养、组培苗过渡基质培养、生根移栽。本发明的石斛的组培育苗方法，通过合理设计培育每个步骤的培养基组分，使得培育的成活率大大提升，较之传统培育方法或组培方法，均提高约80％以上。通过增设组培苗过渡基质培养步骤，可以显著提升生根移栽后种苗的维护成本，使生根率更高，移栽成活率更高。

主权项

一种石斛的组培育苗方法，其特征在于：步骤如下：1)、外植体处理取铁皮石斛当年生幼嫩茎段或茎尖，先用蒸馏水冲洗干净灰尘及污垢，然后用75％的酒精消毒10s，然后用质量百分浓度为0.2％的氯化汞消毒5min，最后用纯水冲洗一次；2)、诱导培养将消毒完毕的外植体置于诱导培养基a中进行培养20天；诱导培养基a组成为：MS基本培养基、2.5mg/L的柠檬酸铁铵、0.75mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、5wt％的蔗糖、0.8wt％的琼脂和1mg/L的苯甲酸钠；诱导培养的温室条件为：温度控制在25℃，每天光照12小时，光照强度为1500Lx；3)、继代增殖诱导结束后，将新长出的新芽切除，剩余部分接种于诱导培养基b中继代增殖20天，从而在切口处获得丛生芽；诱导培养基b组成为：MS基本培养基、1.5mg/L的Na2SiO3·9H2O、0.70mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、4wt％的蔗糖、1wt％的琼脂和20mg/L的NaNO3；4)、生根培养将丛生芽置于成长培养基中进行培养10天使芽发育成长，然后在生根培养基中进行生根培养30天；成长培养基组成为：MS基本培养基、10mg/L的NaH2PO4、0.65mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、6wt％的蔗糖、1.2wt％的琼脂和0.5mg/L的柠檬酸钠；生根培养基组成为：MS基本培养基、20mg/L的Na2EDTA、0.8mg/L的6‑苄氨基腺嘌呤、3wt％的蔗糖、0.75wt％的琼脂和0.005mg/L的VB1；5)、组培苗过渡基质培养将生根后的组培苗用过渡基质进行过渡培养20天，需要将组培苗上的培养基清洗洁净；过渡基质组成为：20wt％的草泥炭、10wt％的麦麸、10wt％的石膏粉和30wt％的农作物秸秆和30wt％的红土；6)、生根移栽将过渡培养的组培苗移栽至种植盘上形成植株，再安装传统方法培育成种苗。