[发明专利]一种经济实用型骨组织蛋白提取与分离方法

摘要

本发明公开了一种经济实用型骨组织蛋白提取与分离方法，属于分子生物学技术领域，具体步骤如下将称重后的离心管置于冰上预冷；量取磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂及苯甲基磺酰氟加到裂解缓冲液后，置于冰上并搅拌均匀；称取股骨干0.3～0.5g；将股骨干放在盛有液氮的研钵内，并将其研磨成粉末状；将股骨干转移至备用的离心管中并称重，即得股骨干的质量，将该质量乘以1/3后，按照0.2～0.4g/mL向离心管中添加裂解液；将混合液在低温下震荡后静置；将悬浊液置于4℃、3000～5000rpm的条件下离心，将上清液吸至新的离心管后，分装保存。本发明中的提取与分离工艺简单且分离出的蛋白质纯度高，因此，该提取与分离的工艺适合在生物学领域推广应用。

主权项

一种经济实用型骨组织蛋白提取与分离方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)准备离心管并称重、记录其质量，将称重后的离心管放置于冰上预冷，备用；(2)量取磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂及苯甲基磺酰氟加入冷裂解缓冲液后，置于冰上并搅拌均匀，即得裂解液，其中，每1ml冷裂解缓冲液中加入5μl磷酸酶抑制剂、1μl蛋白酶抑制剂及5μl苯甲基磺酰氟；(3)用注射针吸取生理盐水将股骨上的骨髓冲洗掉，并称取冲洗后的股骨干0.3～0.5g，备用；(4)将步骤(3)中备用的股骨干放置于研钵内，并向研钵中加入液氮预冷研钵和股骨干，将预冷后的股骨干进行研磨5～10min直至股骨干成粉末状，并在研磨期间向研钵内不断加入液氮，即得粉末状股骨干，备用；(5)将步骤(4)中备用的粉末状股骨干转移至步骤(1)中备用的离心管中，再次称重离心管，计算得出粉末状股骨干的质量，将该质量乘以1/3后，按照0.2～0.4g/mL向离心管中添加步骤(2)中备用的裂解液，即得混合液，备用；(6)将步骤(5)中备用的混合液在3～6℃的条件下震荡15～20min，并将震荡后的混合液静置5～10min，即得悬浊液，备用；(7)将步骤(6)中备用的悬浊液置于4℃、3000～5000rpm的条件下离心5～10min，即得上清液和沉淀，将上清液吸至新的离心管中并分装保存在‑80℃的条件下，即得骨组织蛋白。