[发明专利]一种中国蜂胶黄酮提取物及制备方法和应用

摘要

本发明提供一种中国蜂胶黄酮提取物，其中总黄酮的重量百分含量以芦丁计为54.3％～89.3％，其中含量最高的5种黄酮单体依次为：短叶松素、松属素、短叶松素‑3‑乙酸酯、白杨素和高良姜素。通过由石油醚、乙醇、石油醚‑乙酸乙酯等有机溶剂分步提取分离纯化制备而成。本发明提供的蜂胶黄酮提取物化学成分明确、总黄酮含量高，与现有的蜂胶提取物相比，具有提取物中总黄酮含量高、提取物中黄酮类化合物成分明确，该提取物对癌细胞具有明显的抑制癌细胞作用，能诱导癌细胞调亡，可在制备抗肿瘤药物中的应用。

主权项

1.一种中国蜂胶黄酮提取物的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）石油醚除杂：粉碎中国蜂胶后完全浸泡于石油醚中24 h，搅拌均匀，过滤，自然挥干，得到的蜂胶毛胶颗粒，并将石油醚回收利用；（2）超声波辅助提取：取步骤（1）得到的蜂胶毛胶颗粒，按料液比1:5~1:15 g/mL的比例，用75~95%的乙醇溶液提取2~4次，每次提取15~45 min，过滤，合并滤液，并通过旋转蒸发仪和鼓风式烘箱挥干溶剂至恒重，蒸发浓缩至净膏状，得蜂胶黄酮粗提物；（3）硅胶薄层色谱分离：以200‑300目的硅胶作蜂胶黄酮进行静态吸附剂，4:1、3:1、2:1(v/v)石油醚‑乙酸乙酯双相溶剂为硅胶柱层析洗脱剂，且每个体积比洗脱3个柱体积，蜂胶与硅胶的质量比为1:35，洗脱流速为2 mL/min，利用旋转蒸发仪、氮吹仪和冷冻干燥机进行浓缩、干燥；（4）硅胶薄层色谱分离：取步骤（2）得到的蜂胶净膏配成5 mg/mL的乙醇溶液，在硅胶板上点样，并置于展开槽中展开，10 min后，取出自然晾干，并于254 nm下观察和测量Rf值，选取Rf值在0.25~0.35之间且无拖尾现象的作为最佳体积比的双溶剂体系；（5）硅胶柱层析纯化：将步骤（2）得到的蜂胶净膏配置成20 mg/mL的乙醇溶液，与质量比为1:35的硅胶粉混合均匀，挥干乙醇后倒入硅胶层析柱中，铺上一层海砂，先用石油醚冲洗，算出一个柱体积，然后依次加入5:1、4:1、3:1或4:1、3:1、2:1的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂体系进行分步洗脱，每个梯度冲洗3个柱体积，控制流速为1~2 mL/min，每1/3个柱体积收集一管，合并Rf值相近的蜂胶黄酮洗脱液；（6）浓缩干燥：通过观察洗脱液的颜色及在254 nm下的Rf值，先利用旋转蒸发仪挥去黄酮含量较高组的溶剂，再利用无水乙醇反复冲洗，去除上层混杂的树胶，最后在氮吹仪、冷冻干燥机下干燥至恒重，得到精制的蜂胶黄酮提取物；提取物中总黄酮的重量百分含量以芦丁计，在54.3%~89.3%之间，该总黄酮提取物含量最高的5种黄酮单体依次为：短叶松素、松属素、短叶松素‑3‑乙酸酯、白杨素和高良姜素。