[发明专利]一种复合诱导培养基以及采用该培养基诱导脐带间充质干细胞成神经元样细胞的方法

摘要

本发明公开了一种复合诱导培养基，包括DA、DB、DC三种分化培养液，采用该复合诱导培养基诱导脐带间充质干细胞成神经元样细胞的方法是：首先采用DA分化培养液对脐带间充质干细胞预诱导2天；然后采用DB分化培养液分化诱导1天；最后采用DC分化培养液维持诱导1天；观察诱导后的神经元样细胞形态特征，检测诱导后神经分化相关基因mRNA水平，检测诱导神经元样细胞神经元迁移蛋白DCX、神经元特异性烯醇化酶NSE表达情况：DCX表达阳性者为神经前体细胞,NSE表达阳性者为神经元样细胞。本发明将诱导过程分为三阶段，每阶段诱导时采用不同的培养基，诱导时间短，诱导效率高，诱导分化的神经元样细胞存活稳定，移植后无排斥。

主权项

一种复合诱导培养基，其特征在于：包括DA、DB、DC三种分化培养液，所述DA、DB、DC三种分化培养液的配制方法分别为：DA分化培养液是由每1000ml DMEM‑LG培养基中添加40ml FBS和10μg bFGF组成，其中bFGF的终浓度达10 ng/ml；DB分化培养液是由每1000ml的DMEM‑LG培养基中添加50ml Cerebrolysin、4mg Forskolin、5mg Insulin、0.36mg Hydrocortisone、1.86g KCl、7g NaCl、2.2g NaHCO3、190mg NaH2PO4、95mg MgCl2、222mg CaCl2、1.8g D‑glucose组成；其中各组分的终浓度达到5% Cerebrolysin、10μM Forskolin、5 μg/ml Insulin、1 μM hydrocortisone、2.5mM KCl、120 mM NaCl、26mM NaHCO3、1.25 mM NaH2PO4、1 mM MgCl2、2 mM CaCl2、10 mM D‑glucose；DC分化培养液是由每1000ml的DMEM‑F12培养基中添加10μg bFGF、10μg EGF、10ml100X N2、20ml 50X B27、0.3g L‑glutamine组成；其中各组分的终浓度达到：10 ng/ml EGF、10 ng/ml bFGF、1X N2、1X B27、2mM L‑glutamine；将DA、DB、DC三种分化培养液分别混匀并经过滤除菌后分别保存。