[发明专利]青冈树获取无菌外植体制备及初始芽的方法

摘要

本发明公开了一种青冈树获取无菌外植体制备及初始芽的方法，包括外植体准备、外植体消毒处理以及初始芽诱导工序，采集青冈树当年生嫩枝作为外植体，进行消毒处理后，获得的无菌外植体接种于初始芽诱导培养基中，在适宜环境中培养20‑30天后，获得生长快、活力旺盛的青冈树初始芽。本发明选取当年青冈树生嫩枝为组培繁殖材料，采用一定的浓度及消毒时间的多种药剂相配合的消毒处理的方式，无菌外植体获取率高，达到90%以上，使用了优化诱导培养基及培养方式，外植体褐化少，初始芽发生率高，芽苗伸长快、活力旺盛，具有较好的经济效益和社会效益。

主权项

一种青冈树获取无菌外植体制备及初始芽的方法，其特征在于：包括外植体准备、外植体消毒处理以及初始芽诱导工序，采集青冈树当年生嫩枝作为外植体，进行消毒处理后，获得的无菌外植体接种于初始芽诱导培养基中，在适宜环境中培养20‑30天后，获得生长快、活力旺盛的青冈树初始芽，其操作步骤如下：（1）外植体准备：在至少连续3天晴朗的气候里，采集青冈树的树冠外围生长健壮的当年生嫩枝作为外植体；外植体消毒处理：将外植体用无菌水冲洗干净后，置于体积浓度为0.1‑0.3 %的广谱杀菌剂中浸泡20‑30 min，取出外植体将其置于体积浓度为70 %酒精中浸泡1‑2 min，再移入体积浓度为5‑8 %的升汞溶液中浸泡10‑20 min，取出放于体积浓度为10‑25 %的双氧水和2‑5滴吐温的混合液中搅拌浸泡20‑30 min后，最后用无菌水洗3‑4次，每次冲洗3‑5 min；将外植体裁成带至少1个腋芽，1.5‑3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内，备用；（3）初始芽诱导：将步骤（2）得到的外植体接种于诱导培养基中；所述的诱导培养基为：改良1/2MS培养基 + 噻苯隆（TDZ）0.5‑2.0 mg·L‑1 + MT 1.0‑3.0 mg·L‑1 + NAA 1.0‑3.0 mg·L‑1 + 葡萄糖30 g·L‑1 + 琼脂3.5 g·L‑1 + 0.1‑0.3 %广谱杀菌剂；初始芽诱导培养周期为：20‑30天，置于适宜条件下进行初始芽诱导培养，获得生长健壮、活力旺盛的青冈树初始芽。