[发明专利]基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法

摘要

本发明公开了一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法，基于SPR传感器，结合免疫抑制的方法，根据不同抗原抗体间结合力的差异，通过利用不同强度的再生溶液梯度洗脱，结合SPR传感器的实时监控，在单通道的传感芯片表面实现多种环境激素的同时检测。本发明与现有表面等离子体检测技术相比，检测效率提高了2倍以上，检测成本降低了2倍以上，时间缩短2倍以上，芯片可重复使用几百次，采用本发明的方法解决了传统SPR单一通道不能多重检测的难题，并且可应用于准确检测双酚A、邻苯二甲酸酯等小分子量(<1000Da)物质。

主权项

一种基于再生液优化的表面等离子共振技术同时检测多种环境激素的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)传感芯片表面包被原或抗体的固定：将各环境激素残留组分的包被原或抗体混合至混合液的体积为50‑150μL，所述各包被原或抗体在所述混合液中的浓度均为5‑20μg/mL，再利用活化酯法将所述混合液固定在所述传感芯片表面固定；(2)标准溶液配制：用0.01‑0.1mol/LpH为6‑8的羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液配置各残留组分的标准样品储备液，所述标准样品储备液的浓度均为0.1‑1mg/mL；量取各标准样品储备液，配制其相应的标准原液；用羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液将标准原液配制成不同浓度的标准溶液与过量的固定浓度的相应抗体或包被原混合孵化，得到不同浓度的待测物混合液；(3)测试再生液洗脱能力：测试HCl溶液、NaOH溶液、氯化镁溶液和甘氨酸‑盐酸溶液对于步骤(1)得到的传感芯片表面各环境激素抗体的洗脱情况，选出各组分的最佳再生条件，并对比其再生液洗脱能力的强弱；(4)建立标准工作曲线：单组分检测：采用表面等离子共振谱传感器测量，通入50‑100μL步骤(2)得到的混合液，记录表面等离子体共振传感器的响应信号变化，绘制标准工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得单组分回归曲线的方程；再依次测得其它环境激素的标准工作曲线及单组分回归曲线的方程；多组分同时检测：采用表面等离子共振谱传感器测量，将多种步骤(2)制备的标准溶液与过量的抗体或包被原混合孵化，取孵化后的混合液50‑100μL，通入传感器，记录下表面等离子体共振传感器总体的响应信号变化；然后按照步骤(3)的测试结果，依再生液洗脱能力由弱到强的顺序依次进样洗脱，记录每次残留抗体或包被原的响应值变化；根据不同浓度孵化后的混合液及其相应再生后残留抗体或包被原的响应信号值绘制标准工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得多组分回归曲线方程；(5)定量检测：对于未知含量的含多种环境激素的未知样品进行同时检测，向所述未知样品的待测液中分别加入过量的抗体或包被原，混合孵化后进样，记录总体的响应值变化；按照再生液洗脱能力由弱到强的顺序依次进样洗脱，记录芯片表面每次残留抗体或包被原的响应值变化；将残留抗体或包被原的响应值代入步骤(4)得到的多组分检测的标准工作曲线以及相应的单组分检测标准工作曲线，计算各环境激素的浓度值；依次类推，实现对于环境激素的定量检测；(6)通入0.01‑0.02mol/L、pH为1.2‑2.5的甘氨酸‑盐酸缓冲溶液使芯片再生，再生后的芯片用于下次测量。