[发明专利]抗生素修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法

摘要

抗生素修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法。本发明公开了一种致病菌的分离方法，主要涉及单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的分离方法，该方法为目的菌更好地进行后续研究提供基础，涉及生物技术领域。方法包括磁珠与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联、再用万古霉素修饰牛血清白蛋白包被的磁珠复合物、牛血清白蛋白和万古霉素共修饰的磁珠复合物捕获样品液中的目的菌，通过外加磁场的作用，将被捕获目标菌与样品液进行分离及重悬等步骤。通过磁分离捕获到的目的菌可以直接进行后续分析，与传统的细菌磁分离方法相比，该方法可以对食品基质和血液中的革兰氏阳性菌进行磁分离，提高了样品中目的菌分离效率，同时降低了成本。

主权项

单增李斯特菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁珠，加入到8mL pH＝7.4的灭菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁珠进行洗涤，重复3次，将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液；(2)5.8mg EDC，溶于290μL灭菌的PBS中，6.5mg NHSS，溶于325μL灭菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中，活化1h；(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中；(4)称取牛血清白蛋白24mg，溶解到3mL灭菌的PBS溶液中，然后加入到活化后的磁珠溶液中，反应2h，然后用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中，得到牛血清白蛋白修饰的磁珠；(5)称取200mg万古霉素，169.31mg EDC和47.98mg NHSS，分别溶于灭菌的PBS溶液中，然后混合通过碳化二亚胺法，活化万古霉素表面羧基，活化10min；(6)将活化后的万古霉素加入到牛血清白蛋白修饰的磁珠中，孵育6h；(7)反应完毕后，用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于10mL灭菌的PBS溶液中，得到浓度为2mg/mL的万古霉素‑牛血清白蛋白‑磁珠复合物，用于富集单增李斯特菌；(8)取10mL待测样品溶液，加入0.7mg万古霉素‑牛血清白蛋白‑磁珠复合物，置于培养箱上，以200rpm的转速37℃孵育45min；插入磁力架分离3min；(9)磁分离后，无菌PBS溶液清洗后，用无菌的PBS缓冲液混重悬即得富集有单增李斯特菌的单增李斯特菌‑万古霉素‑牛血清白蛋白‑磁珠复合物。