[发明专利]一种哈茨木霉酸性蛋白酶P6281的异源表达及纯化方法有效
| 申请号： | 201710088628.5 | 申请日： | 2017-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN106834336B | 公开（公告）日： | 2020-12-22 |
| 发明（设计）人： | 罗晓春;邓俊劲;黄伟谦;李志伟 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N9/58;C12R1/84 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 苏运贞 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种哈茨木霉酸性蛋白酶P6281的异源表达及纯化方法。通过提取哈茨木霉的RNA反转录获得cDNA，通过PCR获得酸性蛋白酶基因并插入到表达载体中，重组质粒电转化导入毕赤酵母GS115进行诱导表达，再利用镍柱亲和层析和分子筛层析获得较纯的酶产物。本发明首次成功表达纯化了哈茨木霉酸性蛋白酶P6281，该方法提高了P6281蛋白酶的产量，且获得的酸性蛋白酶酶活远高于现有的木霉属酸性蛋白酶。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 哈茨木霉 酸性 蛋白酶 p6281 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种哈茨木霉酸性蛋白酶P6281的异源表达及纯化方法，其特征在于，步骤如下：(1)培养哈茨木霉；(2)提取哈茨木霉总RNA；(3)RT‑PCR克隆p6281编码序列；(4)TA克隆与重组质粒的筛选鉴定；(5)基因p6281转化毕赤酵母GS115；(6)P6281的发酵诱导及纯化；(7)重组蛋白的SDS‑PAGE检测。
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