[发明专利]可控性HIV‑1基因组靶向编辑系统和其靶向载运系统

摘要

本发明涉及一种可控性HIV‑1基因组靶向编辑系统，包括spCAS9酶搭配多重gRNA表达质粒；所述质粒系统对spCAS9的表达添加了控制元件；所述多重gRNA针对HIV‑1基因组和/或CCR5的编码框基因组序列设计的靶向序列。为提高其靶向性，上述靶向编辑质粒系统加装了多重靶点的脂质体元件辅助输送至CD4、CCR5和/或CXCR4阳性的细胞；为降低对其他细胞的非特异性整合，该系统的质粒只在HIV‑1存在并具有活性时才能够整合；另外，实现了由TAT蛋白和R元件控制的CAS9的表达仅在HIV‑1活病毒存在时才能启动，病毒潜伏或失活后则关闭表达，减少了对靶细胞的潜在危险性。

主权项

一种可控性HIV‑1基因组靶向编辑系统，其特征在于，包括表达可控的编辑酶，搭配多重导引RNA(gRNA)；具体地，所述质粒系统对编辑酶的表达添加了控制元件，使编辑酶的表达或者由LTR启动子和TAT蛋白调控表达，或者由内置哺乳动物源的强启动子和HIV‑1的R元件组成的嵌合启动子控制其表达，或者由内置哺乳动物强启动子和TetO组成的嵌合启动子控制表达；其特征在于，所述编辑酶表达质粒包括如下质粒：p1、p2、p3、p7、p8、p10、p11和p13；所述gRNA表达质粒包括如下质粒：p4、p5、p9、p12、p14和p15。所述多重gRNA指的是针对HIV‑1基因组多个位点和/或CCR5的编码框基因组序列设计的靶向序列。其特征在于，所述多重gRNA表达载体中含有序列表中Seq ID No.1‑5的序列中的至少2种。所述gRNA表达质粒包括如下质粒：p4、p5、p9、p12、p14和p15。所述编辑酶、gRNA共表达质粒包括如下质粒：p6‑1、p6‑2和p6‑3；所述p1的序列如序列表中Seq ID No.7所示，p5的序列如序列表中Seq ID No.20所示，p6‑1的序列如序列表中Seq ID No.8所示，p7的序列如序列表中Seq ID No.9所示，p6‑3和p15的五重gRNA表达序列如Seq ID No.21所示。