[发明专利]一种快速区分鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌的检测方法

摘要

本发明公开了一种快速区分鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌的检测方法，利用顶空气相色谱‑质谱联用技术检测鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌液态发酵产生的挥发性产物，根据两种致病菌产生的挥发性产物种类不同，区分鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌。本发明采用的方法比现有的传统生化实验鉴定时间缩短1‑2天，可以快速区分平板上的鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌，实现快速筛选。该方法自动化程度高，有效降低一线检测人员接触食源致病菌的几率，减少食源致病菌对人和环境污染的风险。

主权项

1.一种快速区分鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌的检测方法，其特征在于，利用顶空气相色谱‑质谱联用技术检测鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌液态发酵的挥发性产物，根据两种致病菌产生的挥发性产物种类不同，区分鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌；所述的检测方法具体包括下列步骤：（1）鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌的培养物制备接种环分别转接鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌到灭菌的营养肉汤培养基中，30‑40 ℃，120‑200 r/min条件下，摇床振荡培养8‑18 h；吸取培养物5 mL转入20 mL顶空瓶内，加盖密封，作为测试样品；其中，营养肉汤组分为：蛋白胨10.0 g/L，牛肉粉 3.0 g/L，氯化钠5.0 g/L，葡萄糖1.0 g/L；（2）HS‑GC‑MS分析顶空（HS）进样条件：加热箱温度50‑60 ℃，定量环温度：100 ℃，传输线温度：115 ℃，样品平衡时间：30‑60 min；色谱柱压力：7.7 psi；填充压力：15 psi；加压时间：0.2 min；进样持续时间：1.0 min，拔针时间：0.5 min；气相色谱（GC）条件：30 m × 250 μm × 0.25μm 的HP‑INNOWax色谱柱；分流进样，分流比为5:1，隔垫吹扫流量为3 mL/min；升温程序：初始温度50 ℃保持2 min，以8 ℃/min升至180 ℃；再以10 ℃/min升至250 ℃，保持5 min，进样口温度：250 ℃ ；载气：高纯氦(He)，流速：1 mL/min；质谱（MS）条件：离子源EI，离子源温度230 ℃，四级杆温度150 ℃，电子能量70 eV，传输线温度280 ℃，采集模式全扫描，质量扫描范围m/z：30‑300 u，溶剂延迟：1‑3 min；（3）鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌的挥发性产物区分鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌产生的挥发性产物种类不同，区分化合物为邻苯二甲酸异丁酯、二甲基二硫和环己醇，鼠伤寒沙门氏菌的液态发酵的挥发性产物中能检测到邻苯二甲酸异丁酯，并且采用面积归一法计算邻苯二甲酸异丁酯的相对含量为6%‑15%，而奇异变形杆菌的液态发酵的挥发性产物中检测到二甲基二硫和环己醇，未检测到邻苯二甲酸异丁酯，并且采用面积归一法计算二甲基二硫的相对含量为5%‑10%。