[发明专利]一种微型种子消毒转接方法

摘要

本发明提供了一种微型种子消毒转接方法，在果荚开裂后，进行微型种子的收集、消毒、转接，培养获得一种微型种子(直径小于1mm)在实生苗组培过程中消毒播种方法。本发明的具体优点如下第一，解决了果荚开裂后，微型种子消毒难的问题；第二，解决了微型种子播种不均匀，密度较大，勤于分瓶的难题。该方法能够保证微型种子完全成熟后播种，提高萌发率。

主权项

一种微型种子消毒转接方法，其特征在于：它包括以下几个步骤：（1）种子的收集：将进行无菌转接的微型种子，在果荚略微发黄、扭曲还未开裂时进行套袋，收集成熟饱满的种子，置于4℃冰箱备用；（2）无菌材料的准备：将1.5ml离心管，无菌水，0.1%‑0.2%琼脂，1000µL移液枪头在121℃高温下进行灭菌20min，然后冷却备用；（3）种子的消毒处理：将步骤（1）获得的微型种子取适量（不要多于离心管1/10的体积）装于1.5mL离心管，加入1mL无菌水，震荡10‑30s，4000‑6000r/s离心30s，将上清及漂浮的未成熟种子弃掉；向离心管中加入1mL70‑75%酒精，震荡10s,4000‑6000r/s离心15s，用移液枪小心去除上清；加入1mL无菌水，震荡10‑30s，4000‑6000r/s离心30s，去上清，重复2‑3次；向离心管中加入1mL0.1% HgCl2溶液，强力震荡3‑5min, 4000‑6000r/s离心30s，去上清；加入1mL无菌水，强力震荡1min，4000‑6000r/s离心30s，去上清，重复3‑5次备用；（4）无菌种子的转接：向步骤（3）获得的盛无菌种子的离心管中加入1mL‑1.5mL的0.1%‑0.2%琼脂，用移液枪吸打至种子均匀悬浮后吸取悬浮液，依据播种密度，将悬浮液滴于固体培养基表面，轻轻晃动培养基，直至悬浮液均匀分布于固体培养基表面，在超净工作台中晾至悬浮液消失即可封口、标记；（5）无菌种子的培养：将步骤（4）获得的无菌种子培养至长出两片真叶后即可分瓶进行壮苗、生根培养，此为通过组培技术获得的实生苗。