[发明专利]一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法

摘要

本发明公开了一种萘普替尼的高效液相色谱分析法，具体是色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(100×4.6mm，3.5μm)，以磷酸盐缓冲液‑甲醇(82∶18)为流动相A，以磷酸盐缓冲液‑甲醇(40：60)为流动相B，梯度洗脱，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm；取萘普替尼或萘普替尼制剂，加流动相A制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取萘普替尼对照品，加流动相A制成浓度为0.005mg/ml的溶液，作为对照品溶液。分别进样，按外标法以峰面积计算，供试品溶液的色谱图中各杂质峰面积的和不得超过1.0％。本发明首次测定了萘普替尼光降解产物及其它有关物质的含量，未见相关文献报导。可快速准确的检测出萘普替尼的光降解产物及其它杂质，操作简单，重现性好，灵敏度高，可较好地控制萘普替尼产品质量，为合成和制剂工艺优化提供了保证。

主权项

1.一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统；色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以体积比为82:18的磷酸盐缓冲液‑甲醇为流动相A，以体积比为40:60的磷酸盐缓冲液‑甲醇为流动相B，梯度洗脱，磷酸盐缓冲液的浓度为0.04～0.1mol/L，pH值为7.0～7.8，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.1ml/min，检测波长为247nm；标准品溶液制备：分别取起始原料、中间体1、中间体2、中间体3、杂质A、杂质B和萘普替尼对照品加流动相A制成每1ml中含0.0025～0.5mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至萘普替尼主峰与相邻杂质B的峰的分离度大于1.5，萘普替尼主峰的理论板数不低于10000，拖尾因子不大于1.5；(2)制备供试品溶液和对照品溶液；取萘普替尼待测样品，加流动相A制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取萘普替尼对照品，加流动相A制成浓度为0.005mg/ml的溶液，作为对照品溶液；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中杂质B及相关有关物质的含量；以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱测定，记录色谱图至萘普替尼主峰保留时间的3～4倍；(4)计算待测样品中各杂质的含量；按外标法以峰面积计算，各杂质峰面积之和不得超过1.0％；其中所述的梯度洗脱中，流动相A比例的变化范围为：于0～10分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从75％变化为55％，流动相B的比例从25％变化为45％；于10～20分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持55％不变，流动相B的比例保持45％不变；于20～30分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从55％变化为0％，流动相B的比例从45％变化为100％；于30～40分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持0％不变，流动相B的比例保持100％不变，于40～45分钟，流动相A和B回到初始比例，色谱柱重新平衡。