[发明专利]针对3’端带有A重复序列的情况下获得完整3’末端序列的3’RACE方法有效
| 申请号： | 201710100037.5 | 申请日： | 2017-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN106636074B | 公开（公告）日： | 2019-07-23 |
| 发明（设计）人： | 潘铖烺 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人： | 张松亭;游学明 |
| 地址： | 361000 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种针对3’端带有A重复序列的情况下获得完整3’末端序列的3’RACE方法，包括如下步骤：1)利用末端转移酶对mRNA进行加尾，增加一段接头序列；以dCTP或dGTP对mRNA进行加尾,增加16‑22bp单碱基重复序列；2)第一链cDNA的合成：以带有oligodG或oligodC的锚定引物作为接头序列，对加尾后的mRNA进行反转录；3)进行3’RACE扩增：以带接头序列的cDNA为模板，根据RACE引物设计原则设计模板内部特异性引物GSP2和其对应的巢式引物NGSP2为扩增的正向引物，同时设计接头序列的互补序列(AUAP)为反向扩增引物，对带接头的cDNA序列进行3’RACE。本发明可解决因序列的特殊结构(带有A重复序列)所导致的3’RACE无法获得完整末端序列的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 针对 带有 重复 序列 情况 获得 完整 末端 race 方法 | ||
【主权项】：
1.一种针对3’端带有A重复序列的情况下获得完整3’末端序列的3’RACE方法，包括如下步骤：1)利用末端转移酶对mRNA进行加尾，增加一段接头序列：以dCTP或dGTP对mRNA进行加尾,增加16‑22bp单碱基重复序列；2)第一链cDNA的合成以带有oligod G或oligod C的锚定引物对加尾后的mRNA进行反转录；3)进行3’RACE扩增以带接头序列的cDNA为模板，根据RACE引物设计原则设计模板内部特异性引物GSP2和其对应的巢式引物NGSP2为扩增的正向引物，同时设计接头序列的互补序列AUAP，长度16‑22bp,作为反向扩增引物，对带接头的cDNA序列进行3’RACE。
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