[发明专利]一种水稻高温抗性突变株的筛选方法

摘要

本发明公开了一种水稻高温抗性突变株的筛选方法，步骤如下：1）选择优良的粳稻品种/系作为高温抗性突变株筛选源；2）取突变株筛选源的花药进行诱导培养，得到花药愈伤后进行热处理；3）挑选花药愈伤转入分化培养基，进行常温分化培养～热处理循环；4）将活性愈伤投入复苏剂中浸泡，然后转入新分化培养基中继续分化培养；5）愈伤组织诱导出苗后，转入继代培养基中壮苗，炼苗后移栽入温室；6）花培苗单株收种获得花培家系，进一步高温抗性筛选获得高温抗性突变株。本发明通过选择花培愈伤热处理作为高温抗性突变株筛选压，通过循环热处理、复苏剂处理来保障愈伤的存活，可以有效获得水稻高温抗性突变株，缩短了水稻高温抗性育种周期。

主权项

1.一种水稻高温抗性突变株的筛选方法，其特征在于：该筛选方法步骤如下：1）选择优良的粳稻品种/系作为高温抗性突变株筛选源：选取产量高、米质好、抗性优良但不耐热的粳稻品种/系作为高温抗性突变株的筛选源；2）取突变株筛选源的花药进行诱导培养，得到花药愈伤后进行热处理：将突变株筛选源正季种植，选取健壮主穗花药进行花药诱导培养，获得花药愈伤组织，待花药愈伤组织普遍长至直径0.3～0.6cm后，调节培养室温度至36～38℃，持续5～7天；3）挑选花药愈伤转入分化培养基，进行常温分化培养～热处理循环：挑选直径为0.4～0.7cm的花药愈伤组织，转入分化培养基，进行常温分化培养，温度控制为25～27℃，时间控制为7～9天，再变换为热处理，温度控制为36～38℃，时间控制为3～4天，然后恢复至常温分化培养，如此常温分化培养～热处理循环4～5次至褐化愈伤组织部分达到90%；4）将活性愈伤投入复苏剂中浸泡，然后转入新分化培养基中继续分化培养：热处理后愈伤组织绝大部分褐化变黑，一些愈伤组织白化丧失活性，切下褐化和白化部分，将留下的活性愈伤投入复苏剂中浸泡处理，然后将活性愈伤转入新的分化培养基中继续分化培养；5）愈伤组织诱导出苗后，转入继代培养基中壮苗，炼苗后移栽入温室：部分愈伤组织经过热处理、复苏剂处理后存活下来，并分化出苗，待花培苗长至2cm之后转接于继代培养基进行壮苗，待花培苗长至8cm后打开封口膜炼苗，10～15天后移栽入温室；6）花培苗单株收种获得花培家系，进一步高温抗性筛选获得高温抗性突变株：温室内花培单株收种，获得粳稻花培家系若干，正季将收获的花培家系大田种植，以筛选源为对照，筛选耐热性得到改良的水稻高温抗性突变株；所述步骤2）中进行花药诱导培养的具体过程如下：（2.1）取材与预处理：将选取的突变株筛选源正季大田常规栽培，取叶枕距为5～7cm、穗与花药呈淡黄绿色、花药长度为颖壳的1/3～1/2且孕穗不裂开的健壮主穗，保留2～3张叶片，75%酒精表面消毒，用湿纱布包裹后置于4℃冰箱中低温预处理2～3天；（2.2）接种：预处理后，将含主穗的稻苞剪下，然后将该稻苞浸泡于75%的酒精中表面消毒3～4min，接着将该稻苞转移于超净工作台中剥离主穗，进一步剥取小穗为大小均匀的小支梗，接下来用消毒过的纱布包裹小支梗，然后将纱布投入浓度为0.1%的升汞灭菌10min，无菌水漂洗3～4次，打开纱布晾干，最后用消毒过的剪刀剪开花药上部，抖药法接种花药于诱导培养基；诱导培养基配方为：N6大量元素+MS微量元素+MS有机质+2mg/L2,4‑D+0.5mg/L NAA+0.5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0.8%植物凝胶，pH值为5.8；所述步骤3）和4）中分化培养基配方为：MS无机盐+MS有机物+蔗糖3%+琼脂0.7%+KT2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+水解蛋白1g/L，pH值为5.8；所述步骤4）中复苏剂成分为：每升水含维生素C 0.3～0.4g，维生素E 0.6～0.8g，Na2‑EDTA 0.8～1.0g，FeSO4∙7H2O 0.5～0.7g，ZnSeO4·5H2O1.2～1.5g，MgSO4·7H2O 0.6～0.8g，植物硫化激动素PSK‑α 0.02～0.03μmol；步骤5）中继代培养基配方为：1/2MS大量+MS微量+MS有机物+蔗糖3%+多效唑 0.2～0.3mg/L+琼脂0.8%，pH值为5.8。