[发明专利]一种葡萄糖氧化酶活性快速测定试剂盒及其检测方法

摘要

一种葡萄糖氧化酶活性快速测定方法，将液体酶液用缓冲液进行适当稀释；吸取3.0mL经过37℃水浴保温的测定试剂加入比色杯中，将比色杯放入分光光度计中，在波长500nm处调零，随后向比色杯中加入0.1mL经过37℃水浴保温的待测酶液，加入比色杯中同时计时，并立即吹吸使之混合均匀，以后每隔1min记录吸光值，连续记录10min。

主权项

一种葡萄糖氧化酶活性快速测定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将液体酶液通过1000～3000RCF离心10～20min，所获得的上清液用缓冲液进行适当稀释；2)吸取1.0mL磷酸盐缓冲液，置于37℃水浴保温5～10min；3)吸取1.0mL经过适当稀释的酶液，置于37℃水浴保温5～10min；4)吸取磷酸盐缓冲液20.0mL、苯酚溶液2.0mL、4‑氨基安替比林溶液1.0mL、过氧化物酶溶液1.0mL和葡萄糖底物溶液6.0mL，总计30.0mL混匀作为测定试剂，取混合液适量置于37℃水浴保温5～10min；5)取一干净比色杯，吸取3.0mL经过37℃水浴保温的测定试剂加入比色杯中，将比色杯放入分光光度计中，在波长500nm处调零，随后向比色杯中加入0.1mL经过37℃水浴保温的待测酶液，加入比色杯中同时计时，并立即吹吸使之混合均匀，以后每隔1min记录吸光值，连续记录10min；6)按照公式计算酶稀释液中葡萄糖氧化酶的活力公式中，XD：酶稀释液中葡萄糖氧化酶的活力，单位为U/mL；ΔA500：一定时间内在波长500nm处溶液吸光值变化；Δt：吸光值变化对应的反应时间，单位为min；1：比色皿厚度，单位为cm；12.9：生成显色物醌亚胺的毫摩尔吸光系数，单位为L.mmol‑1.cm‑1；1/2：每1mol过氧化氢生成醌亚胺物质的量；V总：反应混合液总体积，单位为mL；：V酶酶溶液的体积，单位为mL；7)按照公式计算葡萄糖氧化酶样品的酶活力，固体样品单位为酶活性单位每克(U/g)，其计算公式为：液体样品单位酶活性单位每毫升(U/mL)其计算公式为：公式中，X：葡萄糖氧化酶样品的酶活力，单位为U/g(或U/mL)；Df：所取酶样品全部稀释到合适浓度对应的缓冲液体积，单位为mL；m：称取的固体酶样品质量，单位为g；V：量取的液体酶样品体积，单位为mL。