[发明专利]一种GANT61抑制剂对HL‑60增殖和凋亡的检测方法

摘要

本发明公开了一种GANT61抑制剂对HL‑60增殖和凋亡的检测方法，检测方法包括CCK‑8法检测不同浓度抑制剂对HL‑60细胞生长增殖情况、双染检测抑制剂对HL‑60细胞凋亡情况、RT‑PCR检测不同浓度的抑制剂作用HL‑60细胞的表达情况、免疫荧光技术检测不同浓度的抑制剂作用HL‑60细胞蛋白的表达情况。本发明采用以GLI为靶点的Hedgehog‑GLI信号通路特异性抑制剂来抑制Hedgehog‑GLI通路的表达，观察当Hedgehog‑GLI通路被抑制后，急性髓系白血病细胞增殖、凋亡情况，为白血病的治疗提供新的治疗策略。

主权项

一种GANT61抑制剂对HL‑60增殖和凋亡的检测方法，其特征在于，所述GANT61抑制剂对HL‑60增殖和凋亡的检测方法包括：采用CCK‑8法检测不同浓度GANT61对HL‑60细胞生长增殖情况：取对数生长期HL‑60细胞，调整细胞密度，接种细胞于孔板中，加入不同浓度的GANT61，每孔加入CCK‑8溶液作用，用酶标仪测各孔的吸光度OD值；采用Annexin V‑FITC/PI双染检测GANT61对HL‑60细胞凋亡情况：将HL‑60细胞接种于孔板内，加入不同浓度的GANT61，每日固定时相收集对数生长期HL‑60细胞，用冷PBS洗涤，离心去上清液；用Annexin结合液重悬细胞，向细胞悬液加AnnexinⅤ‑FITC混匀，孵育，用流式细胞仪检测HL‑60细胞凋亡；采用RT‑PCR检测不同浓度的GANT61作用HL‑60细胞GLI 1、BCL‑2、BCL‑XL和GAPDH的mRNA表达情况：将HL‑60细胞接种于孔板内，加入不同浓度的GANT61，RT‑PCR法检测HL‑60细胞GLI1，BCL‑2、BCL‑XL和GAPDH的表达；采用免疫荧光技术检测不同浓度的GANT61作用HL‑60细胞GLI 1蛋白的表达情况：将HL‑60细胞接种于的孔板内，加入不同浓度的GANT61，收集各组HL‑60细胞，冷PBS液洗，兔抗人GLI 1抗体孵育过夜，PBS液洗，FITC荧光标记山羊抗兔二抗室温避光孵育,PBS液洗，5分钟/次，避光孵育，PBS液洗，封固，共聚焦显微镜下分析。