[发明专利]一种梯度因子仿生神经修复支架制备方法

摘要

本发明公开了一种梯度因子仿生神经修复支架制备方法及其应用，所述制备方法包括以下步骤：材料溶解、材料混合、凝胶去气泡处理、梯度因子凝胶铸模、纵向微管结构制备、冷冻干燥、梯度因子仿生神经修复支架交联、去除残留交联剂、冻干；制得梯度因子仿生神经修复支架。本发明通过制备同时具备梯度因子及纵向仿生结构的神经修复支架，通过化学因子诱导及物理拓扑诱导，协同促进神经再生，解决了目前长节段神经缺损修复材料促再生效果差，功能恢复不理想的问题。

主权项

一种梯度因子仿生神经修复支架制备方法，其特征在于，所述梯度因子仿生神经修复支架制备方法包括以下步骤：步骤一，材料溶解：0～250mg取壳聚糖、0～100mg I型胶原分别溶于5ml的醋酸溶液，4℃，溶解24小时；步骤二，材料混合：将5ml壳聚糖溶液倒入5ml胶原溶液中，用匀浆器冰水浴条件下混匀，搅拌速度2500～3000rpm，4min/次，间歇4min，重复混匀4次～5次；得到无神经营养因子的混合凝胶；之后取5ml混合凝胶，加入2500ng NGF或GDNF促神经再生的神经营养因子，形成500ng/ml浓度的混合有神经营养因子的凝胶；步骤三，凝胶去气泡处理：先用真空泵抽真空5min，放气使气泡破碎，重复4～5次；之后离心机5000rpm离心3～5min；再次真空泵抽真空5min，放气使气泡破碎，重复4～5次；最后离心机5000rpm离心3～5min；步骤四，梯度因子凝胶铸模：将混合有神经营养因子的凝胶及无神经营养因子的混合凝胶分别装入1ml注射器，并分别安装两个可编程微量注射泵，两注射器通过Y型管连接到一个混匀器；将混合有神经营养因子的凝胶和无神经营养因子的凝胶通过变速控制，注入混匀器中，之后注入圆柱形模具，并在圆柱形模具一端塞入与圆柱形模具内经相匹配的铜塞；最终在圆柱形模具中形成一个沿纵向的因子梯度；步骤五，纵向微管结构制备：圆柱形模具装入垂直下落架，铜塞距离外部的液氮面5cm～10cm，下落架连接于匀速下降仪上，以1mm/min～5mm/min速度下降；待全部浸入液氮后，取出圆柱形模具；步骤六，冷冻干燥：去除圆柱形模具的铜塞；预冷冷冻干燥机30min～60min；冷冻干燥18h～24h，至圆柱形模具完全干燥；步骤七，梯度因子仿生神经修复支架交联：将制好支架从圆柱形模具中取出，放入20ml 0.5％～10％京尼平乙醇溶液4℃交联4小时～48小时，或放入NHS/EDC溶液交联24h～48h；步骤八，去除残留交联剂：将交联支架从交联剂中取出，放入200ml pH7.0‑7.5的蒸馏水中，摇床40rpm，1小时/次，重复洗3次～6次；步骤九，冻干：将清洗的神经支架取出，放入‑80℃冷冻30分钟～60分钟，放入预冷冻干机中冻干18小时～24小时；制得梯度因子仿生神经修复支架。