[发明专利]快速筛查P53基因外显子5‑8突变的体外检测方法及应用

摘要

本发明提供一种快速筛查P53基因外显子5‑8突变的体外检测方法，包括以下步骤(1)提取外周血样品基因组DNA；(2)设计合成用于扩增P53基因外显子5‑8的特异性引物共4对；(3)使用上述引物对样品基因组DNA进行高分辨率熔解曲线分析联合触底PCR；(4)曲线分析中得到阳性结果的样本，即发生P53基因突变。本发明的检测方法不受突变碱基位点与类型局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可完成对样品突变的分析。操作简便快速，使用成本低，结果准确，能够实现真正的闭管操作。同时针对人群快速筛查，具有高通量、速度快、可试剂盒化、检测成本低等特点。

主权项

一种快速筛查P53基因外显子5‑8突变的体外检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)提取外周血样品基因组DNA；(2)设计合成用于扩增P53基因外显子5‑8的特异性引物共4对；(3)使用上述引物对样品基因组DNA进行高分辨率熔解曲线分析联合触底PCR，95℃预变性10min，60℃15s，72℃15s，95℃10s，50个循环；95℃1min，40℃1min，从65℃开始，以0.02℃每秒的斜率采集熔解曲线，到95℃，之后40℃10s结束，用分析软件对采集后的曲线进行分析；(4)HRM曲线分析：如相对于阴性对照出现了单独的峰，则为阳性结果，表明发生P53基因突变。