[发明专利]一种坛紫菜双单倍体育种的方法

摘要

一种坛紫菜双单倍体育种的方法，选择杂交亲本；促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子培养，得亲本叶状体；选择雌雄叶状体进行杂交；雌雄叶状体培养后去雄性叶状体，保留雌性叶状体单棵培养，至果孢子放出；将果孢子单个培养至萌发成杂合丝状体，打碎继续培养；取出部分丝状体促熟，释放壳孢子，过滤后培养，得F1代叶状体，挑出叶状体，取不同颜色的藻块置于葡萄糖溶液中浸泡酶解，当藻体碎片游离出单细胞或多细胞团时，挑取单个细胞培养；至培养液恢复为正常的消毒海水再继续培养，双单倍体诱导成功；将纯系丝状体吸出扩大培养并作为种质保存；再取出部分丝状体促熟，促使成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子培养，得F2代纯系叶状体。

主权项

一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于包括以下步骤：1)选择杂交亲本；2)分别促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子于消毒海水中培养以获得亲本叶状体；3)培养亲本叶状体后，分别选择健康的雌雄叶状体作为亲本，进行杂交实验；4)进行雌雄叶状体的混合培养，再去掉雄性叶状体，保留雌性叶状体进行单棵培养，直至果孢子放出为止；5)将收集到的果孢子单个培养于试管中，直至萌发成杂合丝状体，再用组织粉碎机将丝状体藻落打碎后，继续培养；6)待杂合丝状体长至足够量时，取出部分丝状体进行促熟，并促使成熟的杂合丝状体释放壳孢子，收集到的壳孢子经筛绢过滤后，置于培养瓶中培养，获得F1代叶状体；7)F1代叶状体培养后，挑出叶状体，于解剖镜下观察，分别取各个不同颜色的藻块放置于葡萄糖溶液中浸泡，然后再转移至海螺酶溶液中酶解，观察细胞解离状况，当在显微镜下观察到藻体碎片游离出大量单细胞或多细胞团时，挑取单个细胞置于96孔板的F1培养液中培养；8)用消毒海水更换1/2F1培养液，直至培养液恢复为正常的消毒海水，再继续培养，即可看到96孔板中单倍体的单细胞被诱导成了双倍体的纯系丝状体，即双单倍体诱导成功；9)将96孔板中的纯系丝状体分别吸出置于广口瓶中静水扩大培养，并作为种质保存；10)待纯系丝状体长至足够量时，取出部分丝状体进行促熟，待丝状体成熟后，促使成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子于消毒海水中培养，获得F2代纯系叶状体；11)对F2代纯系叶状体进行性状测定和评价，从中挑选出符合育种预期的纯系经中试应用确认性状稳定后，即完成坛紫菜双单倍体育种。