[发明专利]一种基于循环酶法的无标记比色传感检测腺苷的方法

摘要

本发明公开了一种基于循环酶法的无标记比色传感检测腺苷的方法，发卡DNA1(HP1)内含腺苷适配体序列，发卡DNA2(HP2)内含富鸟嘌呤(G)序列，加入目标物腺苷，与HP1特异性结合，发卡结构打开，HP1与HP2杂交，随后加入核酸外切酶III(ExoIII)，发生特异性的酶切，使得HP2中富G序列释放，并释放出HP1重新与体系中过量HP2结合引发循环酶切过程。循环结束后，释放出的富G序列形成G四联体，继而催化其无色底物TMB形成有颜色的底物oxTMB。这种颜色变化程度与体系中存在腺苷的浓度相关，实现比色传感检测腺苷。

主权项

一种基于循环酶法的无标记比色传感检测腺苷的方法，其特征在于包括如下步骤：a)合成发卡DNA：HP1和HP2；b)HP1‑腺苷复合物的形成：将腺苷与HP1在37℃孵育1 h；c)循环酶切过程：加入HP2混合均匀后，加入Exo III，45℃孵育1 h；d)比色传感检测：加热降解过量Exo III后，加入含血红素，TMB，H2O2的Tris‑HCl缓冲液，室温反应30 min后加硫酸终止反应，测定溶液吸光度，建立标准曲线；e)样品检测：将未知浓度的腺苷样品，按上述方法检测测得吸光度值，代入标准曲线得到样品中的腺苷浓度。