[发明专利]一种基因工程菌及其在制备莱鲍迪甙A中的应用有效
| 申请号： | 201710123817.1 | 申请日： | 2017-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN106929525B | 公开（公告）日： | 2020-07-03 |
| 发明（设计）人： | 李艳;李阳阳;周伯雅;严明;陈可泉;郝宁;张竹山;于青海;陈剑波 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学;兴化格林生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;C12P19/56;C12R1/865 |
| 代理公司： | 南京新慧恒诚知识产权代理有限公司 32424 | 代理人： | 李晓静 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基因工程菌及其在制备莱鲍迪甙A中的应用，首先构建得到产甜叶菊糖基转移酶UGT76G1和UDP‑葡萄糖焦磷酸化酶UGPase的基因工程菌，它是在组成型表达甜叶菊糖基转移酶UGT的重组菌基础上，过表达UDP‑葡萄糖焦磷酸化酶UGPase，增加糖基化反应的糖基供体量。然后建立全细胞催化反应体系，将甜菊甙转化为莱鲍迪甙A。菌用量浓度为1~10g/L；葡萄糖用量20~120g/L；底物甜菊糖甙的用量为1~20g/L，催化反应过程中，对细胞催化剂进行表面活性剂处理，增加了细胞通透性，大幅提高了莱鲍迪甙A的产量。本发明利用胞内UDPG的合成途径，提高胞内UDPG糖基共体量，避免其额外添加、实现再生循环，酵母的培养和重组酶的表达同时进行，缩短了重组菌培养及重组酶表达的周期。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因工程 及其 制备 莱鲍迪甙 中的 应用 | ||
【主权项】：
一种产甜叶菊糖基转移酶UGT76G1和UDP‑葡萄糖焦磷酸化酶UGPase的基因工程菌，其特征在于，它是将UGT76G1和UGPase编码基因插入到含有两个强启动子PGK1 和TEF1的组成型酿酒酵母穿梭质粒pESC‑LEUD中，并将重组质粒导入表达宿主酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae YPH499中得到的工程菌；UGT76G1编码基因插入载体的酶切位点为SalⅠ和XhoⅠ；UGPase编码基因插入载体的酶切位点为SpeI和Sac I；其中，所述的UGT76G1编码基因为GenBank，No.GenBank:AY345974.1，该基因序列命名为UGT；所述的UGPase编码基因为GenBank，Gene ID: 853830，该基因序列命名为UGPase。
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