[发明专利]一种生物活性肽和体外扩增CIK细胞的方法

摘要

本发明公开了一种生物活性肽和体外扩增CIK细胞的方法，方法包括：抽取外周静脉血分离单个核细胞，置于预先包被生物活性肽和抗CD3单克隆抗体的培养瓶中用无血清培养基培养，以后培养体系中只加入IL‑2和无血清培养基，在37℃、5％CO₂条件下培养14‑21天；其中，所述生物活性肽以知了猴为原料，用胰蛋白酶酶解后用超滤膜截留分子量3000‑1000u的组分，冻干即得。本发明提供的生物活性肽可以高效诱导CIK细胞体外扩增，存活率高，纯度高，本发明体外扩增CIK细胞方法得到的CIK细胞具有出色的体外杀瘤效果和体内抑瘤效果；同时，本发明方法使用廉价易得的生物活性肽替代了传统培养方法中的重组人IFN‑γ和IL‑1α，成本低。

主权项

1.一种体外扩增CIK细胞的方法，抽取外周静脉血分离单个核细胞，用KBM551无血清培养基制成细胞悬液，置于预先包被有抗人CD3单克隆抗体的培养瓶中培养，以后培养体系中只补充IL‑2和无血清培养基，在37℃、5% CO2条件下培养14‑21天，其特征在于：包被抗人CD3单克隆抗体时还同时包被有生物活性肽，所述生物活性肽以知了猴为原料，用胰蛋白酶酶解后用超滤膜截留分子量3000u‑1000u的组分，冻干即得；其中：生物活性肽和抗人CD3单克隆抗体在培养瓶中的包被浓度分别为20μg/mL和5μg/mL，预先24小时包被；细胞悬液置于培养瓶中开始培养24小时后，向培养体系中添加1000 U/mL的IL‑2继续培养，以后培养体系中只补充IL‑2和无血清培养基；所述生物活性肽由如下方法制备得到：将知了猴洗净后绞成肉糜，置于超纯水中，加入胰蛋白酶酶解，酶解条件为：pH值，8.0；酶解温度，45℃；酶解时间，11小时；胰蛋白酶的添加量为底物肉糜重量的0.25%；酶解结束后，加热使胰蛋白酶灭活，冷却至常温；冷却后，9000rpm离心25分钟，取上清，冷冻干燥得冻干粉；将冻干粉用超纯水溶解，依次用截留分子量分别为10000u、5000u、3000u以及1000u的超滤膜对所得到的多肽进行分离，收集截留分子量3000u‑1000u的组分，冻干即得。