[发明专利]一种提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法在审
| 申请号： | 201710135437.X | 申请日： | 2017-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN106947733A | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 刘勇;李文雍;孔凤;辛晶;吴晓庆;张领 | 申请（专利权）人： | 阜阳师范学院 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙)61223 | 代理人： | 潘宏伟 |
| 地址： | 236037 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法，包括以下步骤将重组好的胚胎细胞经激活液激活2‑3h后，置于初级培养液中培养至胚胎细胞发育到二细胞期；将发育到二细胞期的胚胎交替置于第一后期培养液和第二后期培养液中培养，直至克隆胚胎发育至囊胚；所述第一后期培养液KSOM培养液，第二后期培养液是不含谷氨酰胺、乙二胺四乙酸二钠和牛血清蛋白的M16培养液。本发明公开的方法，重组胚胎的不同发育阶段采用不同的培养液，并在二细胞期以后采用两种培养液交替更换培养的方式，使胚胎收到牛血清蛋白的间隔性刺激，促进克隆胚胎的体外发育，提高了发育率，成功率高，有利于进行其他相关试验，节约时间成本和人力成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 小鼠 克隆 胚胎 发育 体外 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将重组好的胚胎细胞经激活液激活2‑3h后，置于初级培养液中培养至胚胎细胞发育到二细胞期；每升所述激活液中含有265‑270mg的CaCl2、0.1mg的FeNO3、400mg的KCl、95‑100mg的MgSO4·7H2O、5‑6g的NaCl、100mg的NaH2PO4、1.5g葡萄糖，余量为四蒸水；所述初级培养液制备方法是向DMEM培养液中添加乳酸，其中乳酸与DMEM培养液的质量比例为1～2:1000；步骤2，将发育到二细胞期的胚胎交替置于第一后期培养液和第二后期培养液中培养，直至克隆胚胎发育至囊胚；所述第一后期培养液为KSOM培养液，第二后期培养液是不含谷氨酰胺、乙二胺四乙酸二钠和牛血清蛋白的M16培养液。
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