[发明专利]一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株及其功能验证方法

摘要

本发明提供了一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株及其功能验证方法，该技术方案首先设计了一对引物，利用该引物以斑马鱼粪便菌群DNA为模板，扩增得到了含有Usp45乳酸乳球菌分泌表达信号肽的pBpp蛋白表达基因，再利用pMG36e质粒为载体，先于大肠杆菌MC1061中扩增质粒，而后采用电转方式导入乳酸乳球菌MG1363。该技术依托于乳酸乳球菌定植肠道的特性，可于胃酸环境中对pBpp蛋白起到保护作用，将重组蛋白的分泌表达场所集中于肠道环境，不仅实现了pBpp蛋白体内表达，而且提升了吸收效果。实验发现，本发明所提供的pBpp重组蛋白表达菌株可高效诱导胰腺中β细胞的增殖。

主权项

一种乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株，其特征在于该菌株是由以下方法制备的：1)以斑马鱼粪便菌群的总DNA为模板，以序列如SEQ ID No.1所示和序列如SEQ ID No.2所示的片段分别为上、下游引物执行PCR扩增，得到序列如SEQ ID No.3所示的DNA片段，即为含有Usp45乳酸乳球菌分泌表达信号肽的pBpp蛋白表达基因；2)取步骤1)所获得的含有Usp45乳酸乳球菌分泌表达信号肽的pBpp蛋白表达基因，连接到pMG36e载体上，即得到重组质粒pMG36e‑Usp45‑pBpp；3)取步骤2)所得的重组质粒pMG36e‑Usp45‑pBpp，转入大肠杆菌E.coli MC1061中，得到重组菌株；4)培养步骤3)所得的重组菌株，从中提取重组质粒pMG36e‑Usp45‑pBpp，将其通过电转法导入感受态的乳酸乳球菌MG1363中，通过红霉素抗性筛选出阳性克隆，得到重组表达菌株pMG36e‑Usp45‑pBpp‑MG1363，即为所述乳酸乳球菌MG1363介导的pBpp重组蛋白表达菌株。