[发明专利]Patatin样磷脂酶Ⅲ的可溶性表达制备方法

摘要

本发明公开了一种Patatin样磷脂酶Ⅲ的可溶性表达制备方法，该方法包括如下步骤A、构建第一重组表达载体将SEQ ID NO1所示核苷酸序列插入表达载体质粒，并同时引入tev酶切位点；B、构建第一重组表达载体将SEQ ID NO2所示核苷酸序列插入步骤A所得第一重组表达载体的多克隆位点处，测序鉴定；C、受体转染与培养将步骤B所得第二重组表达载体转化进大肠杆菌中，当菌体长到特定程度后低温诱导培养菌体；D、目的蛋白提取从步骤C所得菌体中提取具有高活性的Patatin样磷脂酶Ⅲ PLP3。本发明提供了一种利用原核表达系统高效可溶性表达Patatin样磷脂酶Ⅲ的方法。

主权项

Patatin样磷脂酶Ⅲ的可溶性表达制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：A、构建第一重组表达载体：将SEQ ID NO：1所示核苷酸序列（MBP的编码基因malE）插入表达载体质粒，并同时引入tev酶切位点；B、构建第一重组表达载体：将SEQ ID NO：2所示核苷酸序列（目的基因PLP3）插入步骤A所得第一重组表达载体的多克隆位点处，测序鉴定；C、受体转染与培养：将步骤B所得第二重组表达载体转化进大肠杆菌中，当菌体长到特定程度后低温诱导培养菌体；D、目的蛋白提取：从步骤C所得菌体中提取具有高活性的Patatin样磷脂酶Ⅲ PLP3。