[发明专利]一种用LMH细胞系生产禽腺病毒灭活疫苗的方法

摘要

本发明涉及一种用LMH细胞系生产禽腺病毒灭活疫苗的方法，其包括以下步骤1)传代细胞系LMH细胞的制备；2)种毒繁殖；3)病毒收集、浓缩和纯化；4)病毒含量测定；5)病毒的灭活和乳化制成乳剂型灭活疫苗。与传统的细胞培养生产禽腺病毒工艺方法比较，本发明通过优化消化LMH细胞胰酶‑EDTA浓度、LMH细胞的培养时间，以及病毒的接种浓度和病毒收获时间，获得更高抗原滴度的优质灭活疫苗，并以不同的剂量进行注射免疫，疫苗保护率均达到了100％，表明本发明生产的禽腺病毒4型灭活疫苗免疫效力高，对禽腺病毒4型具有完全的免疫保护作用。

主权项

一种用LMH细胞系生产禽腺病毒灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)传代细胞系LMH细胞的制备：将LMH细胞用胰酶‑EDTA消化液进行消化分散传代，加入DMEM培养液在37℃、5％CO2培养箱中培养，直至形成生长良好的细胞单层；(2)种毒繁殖：用禽腺病毒4型毒种按终体积1:200接种到步骤(1)制备的LMH细胞单层中，并在37℃吸附30分钟后吸弃病毒液，加入细胞维持液，于37℃、5％CO2培养58±2小时，直至细胞病变CPE达80％以上，收获细胞毒液；(3)病毒收集、浓缩和纯化：将收获的细胞毒液于‑20℃反复冻融两次，5000rpm，4℃离心10min后收集上清液，即病毒原液，将病毒原液通过50K的中空纤维柱超滤浓缩10倍，即为制苗病毒液；(4)疫苗成品的配制：往制苗病毒液中加入终浓度为0.1～0.2％(v/v)的福尔马林进行灭活，即为疫苗抗原；然后将疫苗抗原乳化制成乳剂型灭活疫苗。