[发明专利]一种戒烟灵中烟碱的手性分析合相色谱串联质谱法

摘要

本发明公开了一种戒烟灵中烟碱的手性分析合相色谱串联质谱法。其特征在于：将戒烟灵样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用两根手性柱串联‑合相色谱串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测戒烟灵中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例。本方法提供的检测方法，样品萃取净化方法简单高效，可降低样品液对色谱柱的污染，合相色谱串联质谱法检测方法灵敏度高，特异性好，可排除假阳性，分析时间短，能够满足大批量戒烟灵样品中烟碱的手性分析。

主权项

1.一种戒烟灵中烟碱的手性分析合相色谱串联质谱法，其特征在于：将戒烟灵样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用手性柱‑合相色谱串联质谱分析，采用峰面积归一化法定量检测戒烟灵中S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱的比例，具体步骤如下：1). 标准溶液的配制：称取约100.0 mg的S‑(‑)‑烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的S‑(‑)‑烟碱标准储备液；称取约50.0 mg的R‑(+)‑烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为1.0 mg/mL的R‑(+)‑烟碱标准储备液；利用S‑(‑)‑烟碱标准储备液和R‑(+)‑烟碱标准储备液稀释配制S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱浓度分别为100 μg/mL和80 μg/mL的混合标准溶液；2).戒烟灵样品的混匀：将戒烟灵样品置于40 oC烘箱中，1小时后将戒烟灵取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛；3). 戒烟灵样品的萃取：称取0.3 g已粉碎的样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5% 的氢氧化钠溶液，涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品，取10 mL甲基叔丁基醚和甲醇溶液到上述具塞离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min；甲基叔丁基醚和甲醇的体积比90:10；4). 萃取液的净化：取1.5 mL萃取上清液于2 mL内含有基质分散固相萃取材料的净化离心管中，于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min，取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进合相色谱串联质谱分析；所述的基质分散固相萃取材料含：150 mg无水硫酸镁，25 mg PSA吸附剂，7.5 mg GCB吸附剂；5).串联手性柱‑合相色谱串联质谱法条件：分析柱1为Trefoil CEL1柱，柱长 150 mm ，内径3.0 mm ，固定相粒径2.5 µm，分析柱2为Chiralcel OD‑H液相色谱柱，柱长 250 mm ，内径4.6 mm ，固定相粒径5 µm；流动相A为：CO2，流动相B：含0.05%异丙胺的甲醇；流速为1.1 mL/min；梯度洗脱条件为：0.0 min，97% A；0.5 min，97% A；8.0 min，92% A；10.0 min，92% A；10.2 min，97% A；12.0 min，97% A；柱温40 ℃；进样室温度：10 ℃；进样体积2 μL；背压：1600 psi；ISM补偿流路流动相为含0.1%甲酸的甲醇，流速为0.3 mL/min，分析时间总计12 min；质谱条件：离子源：电喷雾源，扫描方式为正离子扫描，离子源温度为300 ℃，电喷雾电压为5000 V，雾化气压力为40 psi；检测方式：多反应监测；通过对峰面积进行归一化定量S‑(‑)‑烟碱和R‑(+)‑烟碱占总烟碱的比例。