[发明专利]一种高纯度块菌菌种的培育方法

摘要

本发明提供了一种高纯度块菌菌种的培育方法，其特征是块菌子囊果去除杂质、用水清洗干净并表面消毒后，将子囊果内孢子组织在试管内进行培养，然后对培养出的母种进行提纯和复壮，高纯度复壮菌种接入到食用菌液体母种电磁涡流增氧机内进行液体母种培养，培养出的液体母种接入到培养罐中培养液体生产用菌种。使用本发明培育块菌菌种繁殖系数高，原料成本低；从子囊果分离得到的菌种，经过驯化、提纯、复壮等一系列技术处理后，提高了菌种的纯度，激活了子囊果孢子的活性，提高了菌种生命力及种苗的合成感染率；获得的菌种满足低温存放时的养份供应，保藏容易和保藏时间长。使用本发明生产的块菌菌种质量好、成本低。

主权项

一种高纯度块菌菌种的培育方法，包括块菌子囊果处理、试管母种培养、母种提纯复壮、液体母种培养、液体生产用菌种培养，其特征是：（1）块菌子囊果处理：选取野生生长饱满、桑椹状突疣较少，疣突较园钝，手捏相对较硬，未见自然裂纹，经显微观察剖开后的子囊果孢子纹理清晰、成熟的黑褐色孢子占总孢子量的80%以上，与未成熟的黄褐色的孢子占总孢子量的20%以下，作为分离用材料，将选用的子囊果，去除杂质后用水清洗干净、并表面消毒；（2）试管母种培养：将步骤1的块菌子囊果在超净工作台上用经消毒灭菌后的手术刀剥去皮层后，将露出的子囊果内孢子组织切割后接入已通过灭菌的试管内进行培养，培养温度为10～38℃，培养时间为15～18天，培养基配方为：鲜阔叶木屑煎汁液130～150mL，鲜松毛煎汁液130～150mL，马铃薯煎汁液270～300mL，块菌生长土浸泡液400～470mL，麦芽糖15～20g/L，硫酸镁0.5～5g/L，磷酸二氢钾1～5g/L，琼脂18～20g/L，pH值4.5～7.5，鲜阔叶木屑煎汁液为鲜阔叶木屑与水按质量比1：1.3～1.5混合后煮20～30分钟后的滤液，鲜松毛煎汁液为鲜松毛与水按质量比1：1.3～1.5混合后煮20～30分钟后的滤液，马铃薯煎汁液为马铃薯与水按质量比1：1.4～1.5混合后煮10～15分钟后的滤液，块菌生长土浸泡液为块菌生长地土壤与水按质量比1：2.0～2.5混合充分搅拌后的澄清过滤液；（3）母种提纯复壮：按步骤2培养基配方配制的培养基在121℃高压下灭菌20～30分钟，冷却至30～45℃时，加入5.1～5.5万单位/L的金霉素混合均匀后，倒入步骤2的试管内，覆盖母种厚度1～3mm，凝固后放置在18～25℃条件下培养10～15天后，挑取先端菌丝转管复壮，在15～25℃条件下培养18～20天，转管培养的培养基配方与步骤2培养基相同；（4）液体母种培养：液体母种培养液经121℃高压灭菌20～30分钟，冷却后放入食用菌液体母种电磁涡流增氧机内，将步骤3得到的高纯度复壮菌种接入到食用菌液体母种电磁涡流增氧机内，在转速80～300转/分钟，温度18～28℃的条件下培育15～18天，液体母种培养液的配方为：鲜阔叶木屑煎汁液130～150mL，鲜松毛煎汁液130～150mL，马铃薯煎汁液270～300mL，块菌生长土浸泡液400～470mL，麦芽糖5～10g/L，硫酸镁0.5～5g/L，磷酸二氢钾1～5g/L，蛋白胨0.5～10g/L，VB1 5～50mg/L，pH值7.5～8.5，鲜阔叶木屑煎汁液为鲜阔叶木屑与水按质量比1：1.3～1.5混合后煮20～30分钟后的滤液，鲜松毛煎汁液为鲜松毛与水按质量比1：1.3～1.5混合后煮20～30分钟后的滤液，马铃薯煎汁液为马铃薯与水按质量比1：1.4～1.5混合后煮10～15分钟后的滤液，块菌生长土浸泡液为块菌生长地土壤与水按质量比1：2.0～2.5混合充分搅拌后的澄清过滤液；（5）液体生产用菌种培养：将按步骤4培养液配方配制的培养液添加聚氧丙烯甘油0.1~0.4 mL /L后高压灭菌，灭菌冷却后添加金霉素5.1～5.5万单位/L，混合均匀后装入培养罐中，装至培养罐的5/7，接入步骤4培养的液体母种，接入量为培养液体积的5～10%，温度18～28℃的条件下培育15～18天，即成为液体生产用菌种。