[发明专利]KARS基因点突变小鼠模型的构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201710144200.8 | 申请日： | 2017-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN106929533B | 公开（公告）日： | 2021-01-12 |
| 发明（设计）人： | 汪锡金;杨涛;余力加;何龙霞;宋珺;王西樵 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属新华医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供KARS基因点突变小鼠模型的构建方法及其应用，KARS基因点突变小鼠模型的构建方法包括如下步骤：步骤一：靶点构建，寻找与神经系统疾病相应的基因，并进行靶点设计；步骤二：设计Guide‑RNA/Cas9mRNA，并且制备成质粒，转录后显微注射到受精卵细胞质中；步骤三：Founder小鼠鉴定；步骤四：F1代小鼠鉴定。本发明的构建具有神经系统疾病的小鼠模型的方法及其应用，由于针对KARS基因的定点突变来进行，使得模型小鼠的疾病研究能够在与真实疾病的发生和发展更加接近的条件下进行，其研究的结果更具参考价值。 | ||
| 搜索关键词： | kars 基因 突变 小鼠 模型 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种KARS基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：靶点构建1)寻找KARS基因的CDS区，明确外显子部分，点位：R504H；2)靶点设计；步骤二：获取受精卵，并进行显微注射；1)Guide‑RNA，Cas9RNA转录；2)纯化转录产物；3)将Guide‑RNA/Cas9mRNA显微注射到受精卵细胞质中；步骤三：将受注射过Guide‑RNA/Cas9mRNA的受精卵进行培养，然后进行胚胎移植；步骤四：Founder小鼠鉴定：提取出生的胚胎移植小鼠的DNA，进行PCR鉴定；步骤五：F1代小鼠鉴定，将Founder小鼠与野生型小鼠交配，生出的小鼠为F1代，若F1代中有阳性小鼠出生，表明相关小鼠模型构建成功。
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