[发明专利]一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒及其应用方法

摘要

一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，包括甘胆酸试剂R1、甘胆酸试剂R2和甘胆酸标准品，该种检测过程使用了竞争法，从而也就控制了试液浑浊度变化在较高的范围中，这样即可以使普通的分析仪器进行检测，又有利于保证仪器的精准度。

主权项

一种测定人血清中甘胆酸的试剂盒，包括甘胆酸试剂R1、甘胆酸试剂R2和甘胆酸标准品，其中，甘胆酸试剂R1包括MEC缓冲液50～175mmol/L，牛血清蛋白0.1～2g/L，NaCl电解液100～200mmol/L，Pro‑Clin3000.05～0.8g/L，乙二胺四乙酸二钠3mmol/L，叠氮钠0.6g/L，人工合成的甘胆酸0.05～1.5mg/L；甘胆酸试剂R2的配制步骤：S1、取5ml的包被缓冲液，加入80ul的80～300nm羧基胶乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗体，37度反应1小时；S2、用包被缓冲液稀释一定量的EDC试剂为1mg/ml，加50ul到上述S1的反应液中，继续反应1小时；S3、反应结束后，用超声粉碎；S4、用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去上清等体积的偶联缓冲液，再加入400ul的封闭缓冲液，37度反应1小时；S5、封闭完成后的试剂，超声，方法同步骤S3；S6、超声后，用离心机离心，10000转/分，10分钟，弃去上清，加入与弃去的上清等体积的存储缓冲液；S7、去除黑色沉淀的，偶联有抗体的胶乳微球，即为甘胆酸试剂R2；甘胆酸标准品包括MEC缓冲液100mmol/L、牛血清蛋白1.5g/L、乙二胺四乙酸二钠3mmol/L、NaCl电解质166mmol/L和Pro‑Clin300 0.5g/L并向上述配置的缓冲液中加入不同量的人源性甘胆酸得到浓度分别为0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml的一组标准品。