[发明专利]基于淀粉样蛋白实现小分子肽类高效分泌表达的方法及其应用有效
| 申请号： | 201710148456.6 | 申请日： | 2017-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN107058363B | 公开（公告）日： | 2020-12-22 |
| 发明（设计）人： | 王菊芳;王蒙;张俊杰;马毅;李杉 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/435;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 苏运贞 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于淀粉样蛋白实现小分子肽类高效分泌表达的方法及其应用。该方法包括如下步骤：将自剪切短肽通过一个连接肽与自聚集肽进行拼接，得到融合蛋白；然后将信号肽连接到融合蛋白的N端，得到表达载体I；再将小分子肽类连接到表达载体I上，得到分泌表达载体II；敲除细菌基因组中的csgBAC基因，构建突变株，得到表达宿主；将分泌表达载体II转化到表达宿主中，再将得到的工程菌通过诱导表达，离心收集菌体，加入诱导剂，再离心收集上清，得到小分子肽类。本发明将融合蛋白表达至菌体表面，利用自剪切短肽的自剪切特性，无需细胞破碎、蛋白纯化等繁琐操作，且得到的小分子肽类与化学合成的小分子肽类具有相同的抑菌活性。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 淀粉 蛋白 实现 分子 高效 分泌 表达 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种基于淀粉样蛋白实现小分子肽类高效分泌表达的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将自剪切短肽通过一个连接肽与自聚集肽进行拼接，得到融合蛋白；(2)将信号肽连接到步骤(1)中得到的融合蛋白的N端，得到表达载体I；(3)将小分子肽类连接到步骤(2)中得到的表达载体I上，得到分泌表达载体II；(4)敲除细菌基因组中的csgBAC基因，构建突变株，得到表达宿主；(5)将步骤(3)中得到的分泌表达载体II转化到步骤(4)中得到的表达宿主中，得到工程菌；(6)将步骤(5)中得到的工程菌通过诱导表达，离心收集菌体，再加入诱导剂，离心收集上清，得到小分子肽类。
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