[发明专利]通过DNA链杂交和表面增强拉曼技术检测汞离子的方法

摘要

本发明公开了通过DNA链杂交和表面增强拉曼技术检测汞离子的方法，将捕获链DNA连接于磁性微球上，通过捕获链DNA、汞离子与靶标链DNA间形成的T‑Hg2+‑T结构稳定连接靶标链DNA，再经过引发链DNA的固定以及发卡DNA链循环放大杂交链式反应，增加了生物条形码的结合位点，并且根据发卡DNA链上连接的生物素与生物条形码上结合的链霉亲和素之间较强的结合能力将生物条形码连接到磁性微球上，从而实现了拉曼信号的放大，降低了汞离子的检测限；本发明提供的检测方法的干扰性小，选择性高，满足了对于汞离子高灵敏度、高准确度的检测需求。

主权项

通过DNA链杂交和表面增强拉曼技术检测汞离子的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)金纳米颗粒的合成：将0.01％氯金酸加热至沸腾，充分搅拌下加入柠檬酸钠溶液，持续加热20min回流冷凝，待反应溶液颜色变化稳定后停止加热，保持回流至反应溶液温度降至室温，于棕色瓶中4℃保存备用；(2)生物条形码的合成：对信号链DNA进行活化，向活化后的信号链DNA中加入步骤(1)中合成的金纳米颗粒，遮光轻微震荡24h；使用NaCl老化12h，加入链霉亲和素反应1h，再用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤并分散，4℃保存备用；(3)捕获链DNA的固定：使用咪唑‑盐酸将磁性微球清洗干净，依次加入EDC和NHS，活化30min；然后加入捕获链DNA，轻微震荡16h；对固定有捕获链DNA的磁性微球进行磁性分离，并用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤；加入BSA反应30min，并重复用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤三次，将洗涤后的磁性微球分散于Tris‑HCl缓冲溶液中；(4)靶标链DNA的固定：将靶标链DNA和不同浓度的汞离子加入到步骤(3)制得的溶液中，轻微震荡反应2h，磁性分离，用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤并分散；(5)引发链DNA的杂交反应：将引发链DNA加入步骤(4)制得的溶液中，轻微震荡反应2h，磁性分离，用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤并分散；(6)DNA杂交链式循环放大反应：将末端修饰有生物素的发卡DNA链H1及发卡DNA链H2混合均匀，加入到步骤(5)制得的溶液中，轻微震荡2.5h，磁性分离，用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤并分散；(7)拉曼信号的检测：将步骤(2)中合成的生物条形码加入到步骤(6)制得的溶液中，轻微震荡且避光反应1h，磁性分离，用Tris‑HCl缓冲溶液洗涤并分散制成检测溶液；将检测溶液均匀分散于金片上，蒸干液滴，于激光共聚焦拉曼显微镜下进行检测，记录拉曼信号强度，并且根据汞离子浓度和拉曼信号强度绘制工作曲线，通过所述工作曲线对所需检测的样品进行定量分析。