[发明专利]一种乙型肝炎病毒基因组DNA的5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷的标记和检测方法有效
| 申请号： | 201710153469.2 | 申请日： | 2017-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN106929484B | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 马春红;武专昌;梁晓红;高立芬;王泽华;宋晓佳;徐蕾琪;王体潇;宋洋;杜宪红;谭思雨 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12Q1/70;G01N33/569;C12R1/93 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种乙型肝炎病毒基因组DNA的5‑乙炔基‑2’脱氧尿嘧啶核苷的标记和检测方法，具体的包括：(1)扩增NTCP基因，构建NTCP真核表达质粒pcDNA‑NTCP，将pcDNA‑NTCP转入Huh7肝癌细胞中构建NTCP稳定表达的Huh7‑NTCP细胞系；(2)使用EdU处理HepG2.2.15细胞，获取含EdU‑HBV的细胞上清，使用PEG8000处理，浓缩后进行HBV基因组拷贝数定量；(3)将HBV细胞传代培养至细胞汇合度为50‑80％时，使用EdU‑HBV感染Huh7‑NTCP细胞，然后进行EdU‑HBV荧光检测。本发明与现有技术相比，操作简单，图像结果无需进行后期处理，且各染色结果互不干扰。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 乙型肝炎 病毒 基因组 dna 乙炔 脱氧 尿嘧啶核苷 标记 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于非疾病诊断目的的HBV基因组DNA的5‑乙炔基‑2’脱氧尿嘧啶核苷的标记和检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)扩增NTCP基因，构建NTCP真核表达质粒pcDNA‑NTCP，将pcDNA‑NTCP转入Huh7肝癌细胞中构建NTCP稳定表达的Huh7‑NTCP细胞系；(2)使用EdU处理HepG2.2.15细胞，获取含EdU‑HBV的细胞上清，使用PEG8000处理，离心，弃上清，对沉淀中进行HBV基因组拷贝数定量；(3)将HBV细胞传代培养至细胞汇合度为50‑80％时，使用EdU‑HBV感染Huh7‑NTCP细胞，然后进行EdU‑HBV荧光检测。
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