[发明专利]通过碱基错配解决多重PCR时等位基因扩增不平衡的方法

摘要

本发明公开了一种通过碱基错配解决多重PCR时等位基因扩增不平衡的方法。该方法是针对由于多重PCR而导致的等位基因扩增不平衡的情况的，包括如下步骤：通过对原有多重PCR引物中扩增效率相对较强的引物序列人为引入错配碱基，来削弱所述扩增效率相对较强的引物与模板的结合能力，从而解决等位基因扩增不平衡的问题；所述原有多重PCR引物为对所述待测等位基因进行多重PCR扩增出现等位基因扩增不平衡情况时所采用的多重PCR引物。实验证明，该方法确实可以有效的解决由于多重PCR而导致的等位基因扩增不平衡。

主权项

1.一种解决由于多重PCR而导致的等位基因扩增不平衡的方法，包括如下步骤：通过对原有多重PCR引物中扩增效率相对较强的引物序列人为引入错配碱基，来削弱所述扩增效率相对较强的引物与模板的结合能力，从而解决等位基因扩增不平衡的问题；所述原有多重PCR引物为：对待测等位基因进行多重PCR扩增，出现所述待测等位基因扩增不平衡情况时所采用的多重PCR引物；所述待测等位基因为基因型分别为DRB1*01:01:01和DRB1*15:01:01:01的HLA‑DRB1基因；所述原有多重PCR引物中用于扩增基因型为DRB1*01:01:01的HLA‑DRB1基因的引物对由上游引物A1和下游引物B组成，用于扩增基因型为DRB1*15:01:01:01的HLA‑DRB1基因的引物对由上游引物A5和所述下游引物B组成；所述上游引物A1的序列如序列表中序列1所示；所述上游引物A5的序列如序列表中序列2所示；所述下游引物B的序列如序列表中序列3所示；所述扩增效率相对较强的引物为用于扩增所述基因型为DRB1*01:01:01的HLA‑DRB1基因的引物；所述方法中，将所述上游引物A1自5’末端起的5个碱基由“CACAG”替换为“AGACA”，其余碱基序列保持不变，从而解决了所述基因型分别为DRB1*01:01:01和DRB1*15:01:01:01的HLA‑DRB1基因扩增不平衡的问题。