[发明专利]一种牛肠激酶轻链负载磁珠及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710158025.8 | 申请日： | 2017-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN106978429B | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 杨安钢;阎博;胡志嵩;赵晶;欧阳清;杜晓;李昂 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/64;C12N11/14;C07K1/14 |
| 代理公司： | 61200 西安通大专利代理有限责任公司 | 代理人： | 王霞<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 710032陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种牛肠激酶轻链负载磁珠及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域。本发明设计合成生物素化酶识别肽与bEKL融合表达的核苷酸序列，通过在大肠杆菌中高效表达和体外复性的方法，制备生物素修饰的bEKL，而后利用生物素与链霉亲合素之间极强的亲和力，将bEKL稳定负载于偶联链霉亲合素的磁性颗粒。应用该方法制备的bEKL负载磁珠可以特异性切割含有肠激酶酶切位点的底物，能够用于重组蛋白融合标签的切除。本发明制备的bEKL负载磁珠提高了酶的使用效率，降低了使用成本，为生物工程制药业、生物化学和分子生物学等方面的研究提供了有力的工具。 | ||
| 搜索关键词： | 种牛 肠激酶 负载 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种牛肠激酶轻链负载磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)基因合成生物素化酶识别肽段Avi·tag与bEKL融合表达的核苷酸序列，采用定向克隆法将该核苷酸序列插入pET-28a质粒中，构建得到重组质粒pET-28a-Avi-bEKL；生物素化酶识别肽段Avi·tag与bEKL融合表达的核苷酸序列全长867bp，其5’端含有NcoI酶切位点，3’端含有XhoI酶切位点，序列如SEQ ID NO.1所示；/n2)将重组质粒pET-28a-Avi-bEKL转化入大肠杆菌中，诱导表达生物素修饰的bEKL包涵体蛋白，然后超声裂解破碎细菌，制备包涵体，采用稀释复性法，得到生物素修饰的bEKL；/n3)将生物素修饰的bEKL与链霉亲合素磁珠孵育，利用生物素与链霉亲合素之间极强的亲和力，制备得到bEKL负载磁珠。/n
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