[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的向日葵茎芯多糖的提取分离方法

摘要

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的向日葵茎芯多糖及其提取分离方法，首先采用水提醇沉发提取粗多糖，粗多糖除蛋白后用离子交换柱层析法，分别用不同浓度的NaCI溶液梯度洗脱进行分离，经透析袋透析除盐后浓缩，冷冻干燥，即得抗肿瘤活性高的向日葵茎芯多糖HALWP‑4。与现有技术相比，本发明采用活性跟踪分离方法从向日葵的茎芯中分离纯化出具有抗肿瘤作用的水溶性活性多糖成分，和传统的先分离纯化单体化学成分再进行活性测试方法相比，能大大减少分离工作中的盲目性和在分离过程中造成的活性成分丢失。

主权项

一种具有抗肿瘤活性的向日葵茎芯多糖的提取分离方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取于秋季采收的向日葵的秆，将向日葵茎芯剥离出来，置于阴凉处自然风干，再放入40℃烘箱中干燥8h。将干燥的向日葵茎芯用粉碎机粉碎后备用。(2)取一定量干燥的向日葵茎芯粉末，过筛，用95％乙醇回流提取两次，以去除脂溶性成分；再用80％乙醇回流提取两次，以除去单糖和低聚糖。所得残渣烘干，挥发去除有机溶剂后，在一定的料液比、浸提时间和浸提温度下，对向日葵茎芯多糖进行多次浸煮提取。(3)收集合并多次浸煮提取所得提取液，将提取液过滤后减压浓缩后加入95％乙醇，静置24h，3000r/min离心15min得沉淀，将所得沉淀用丙酮、乙醇洗涤并烘干，即得到向日葵茎芯多糖粗产品。(4)根据苯酚‑硫酸法测定上述多糖粗产品在490nm波长处的吸光度，并以多糖提取率为考察指标，测定得到的多糖粗产品中多糖的含量为85.37％。(5)取上述多糖粗产品，经过除蛋白后，溶解于纯化水中，过DEAE纤维素DE‑52离子交换柱进行分离，以一定的流速，依次用4种不同浓度的NaCI溶液梯度洗脱，收集四种洗脱组分，经透析、浓缩、冷冻干燥，得到四种不同的洗脱组分HALWP‑1、HALWP‑2、HALWP‑3和HALWP‑4，分别测定各不同洗脱组分的体内抗肿瘤活性，其中抗肿瘤活性最好的为HALWP‑4。