[发明专利]一种鉴定黄瓜全雌性状的分子鉴别方法

摘要

本发明公开了一种鉴别黄瓜全雌性状的分子鉴定方法，包括黄瓜基因组DNA的提取、qPCR扩增反应及利用反应Ct值的比较计算分析，根据黄瓜全雌性控制F基因附近基因组特异序列，人工合成四对由一定数量的碱基组成特定序列的核苷酸分子，以这些对核苷酸分子为引物，通过qPCR反应获得相应的Ct数值，利用数值之间的比较获得关于F基因拷贝数的比值，继而可以准确区分黄瓜全雌系、亚全雌系和非雌性系。这一方法用于杂交育种黄瓜苗期筛选，能极大地加速黄瓜全雌性状育种进程。

主权项

一种鉴定黄瓜全雌性状的分子鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：人工合成四对核苷酸序列作为引物，这些引物是由碱基组成的特定序列的寡聚体，其中：引物组合一，正向引物：5’‑AAGGCATTGGTAGAATTTATGGCGG‑3’反向引物：5’‑TGGATAGTATGGAGTTGGGAGGAGA‑3’引物组合二，正向引物：5’‑TAGATTGATGAGCAAAAGCAGGAGC‑3’反向引物：5’‑TATGGGATGATGCCAAGCAGTAGTA‑3’引物组合三，正向引物：5’‑AAATCTCTTGGGACTGGCAGAAAAG‑3’反向引物：5’‑AAATGGTGTTGGGGTTGTTTCACA‑3’引物组合四，正向引物：5’‑TCACTGCTTCCACAAACTGATCAAC‑3’反向引物：5’‑TGAGGGTCTAAAGGCGTACAGAAAA‑3’提取黄瓜基因组的DNA，以引物对黄瓜基因组DNA进行qPCR检测，获得各引物组合对应的基因组DNA扩增反应的Ct值；取引物组合一至组合三的qPCR扩增Ct均值，与引物组合四扩增Ct值进行比较，比值计算方法采用2‑ΔCt方法计算，比值≥2则检测材料为全雌性黄瓜，比值≈1则检测材料为非雌性系黄瓜，比值≈1.5则检测材料为亚全雌系黄瓜。