[发明专利]一种人血浆中萘普生的定量分析方法

摘要

本发明公开了一种人血浆中萘普生的定量分析方法，包括如下步骤（1）标准工作溶液的配制；（2）样品处理；（3）标准曲线制作；（4）定量分析取试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中萘普生的浓度。本发明应用液质联用技术(HPLC‑MS/MS)测定人血浆中萘普生的浓度，通过色谱条件和质谱条件的优化，提高了提取回收率、减少了基质效应、增强了选择性、改善了检测灵敏度，使得整个定量检测方法切实可行，操作简便，重复性高，准确性好，可操作性强，可以直接运用于生物等效性中样品检测分析。

主权项

一种人血浆中萘普生的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）标准工作溶液的配制：称取萘普生，加入甲醇，配制成浓度为2.00~3.00 mg•mL‑1的萘普生储备液，将所述萘普生储备液用体积比1:1的甲醇‑水溶液稀释成梯度浓度为0.0250~25.0 μg•mL‑1的萘普生工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为0.025~200 μg•mL‑1的萘普生平行工作溶液；称取甲苯磺丁脲，加入甲醇配制成浓度为0.200~0.300 mg•mL‑1的内标储备液，再用体积比1:1的甲醇‑水溶液稀释成80~120 μg•mL‑1的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0~10℃下保存，备用；取空白人正常血浆，分别加入所述萘普生工作溶液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，其浓度范围为0.200~200 μg•mL‑1；取空白人正常血浆，分别加入所述萘普生平行工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为1.00~8000 μg•mL‑1；（2）样品处理：取等体积的校正标样、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往校正标样、质控样品、试验样品中分别加入所述内标工作溶液，往空白人血浆和水中分别加入体积比1:1的甲醇‑水溶液；向上述每个混合液中加入超纯水和甲基叔丁基醚，混匀，离心，转移上清液并用氮吹吹干，将各提取物保存；（3）标准曲线制作：将步骤（2）得到校正标样、质控样品的提取物进行LC‑MS/MS分析测定，以萘普生和内标甲苯磺丁脲的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中萘普生的浓度为横坐标制作标准曲线；（4）定量分析：取试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中萘普生的浓度。