[发明专利]一种乙型脑炎病毒悬浮培养方法

摘要

本发明提供了一种乙型脑炎病毒悬浮培养方法，该技术方案依托于动物细胞的微载体培养技术展开。由于微载体为单层贴壁细胞的生长繁殖提供了更大的表面积，因此为细胞生长提供了一个均质的悬浮培养系统，利用微载体作为细胞定殖的物理支撑，再结合优化的培养条件，从而提高了细胞及病毒的培养密度。本发明实现了乙型脑炎病毒的规模化培养，提供大量的优质病毒抗原。同时，本发明克服了传统转瓶培养动物原代细胞生产的单批产量不高、批间差异大、产品质量不稳定、生产成本和污染机率高等缺陷。此外，本发明能连续培养、占地小、生产规模大、对细胞伤害小，克服了传统工艺占地空间大，培养不连续，生产成本高等缺点。

主权项

一种乙型脑炎病毒悬浮培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)取微载体加入生物反应器，以每克微载体对应200～300ml PBS缓冲液的比例加入PBS缓冲液，浸泡2～3h，更换PBS缓冲液再浸泡1～2h，期间持续搅拌，弃去PBS缓冲液；以每克微载体对应100～150ml PBS缓冲液的比例加入PBS缓冲液，湿热灭菌，冷却后弃去PBS缓冲液，以培养基洗涤微载体2～3遍，加入新鲜培养基，冷却至2～8℃，平衡8～12h，备用；2)取步骤1)处理后的微载体，平衡其温度至25～30℃，补充培养基至其中微载体浓度为2～3g/L；将Vero细胞以5×105～7×105cell/L的浓度接种，搅拌混匀，静置；3)调节生物反应器温度36～38℃，在搅拌条件下培养，培养总时间35～40h时流加补料，培养总时间70～100h时接种乙型脑炎病毒；4)以0.1～0.5的MOI值接种病毒，36～38℃静置吸附，而后在搅拌条件下培养，此后16～24h时流加补料、50～70h时收获病毒。