[发明专利]一种利拉鲁肽的固相合成法

摘要

本发明公开了一种制备利拉鲁肽的方法，主要解决现有技术存在的使用重金属催化剂以及合成步骤复杂、纯化困难等技术缺陷。本发明技术方案包括如下步骤1）以Fmoc‑Gly‑王树脂为载体，采用Fmoc固相合成法逐一偶联第2位至第12位氨基酸，得到多肽树脂I；2)酸解去除第11位Lys侧链的mmt保护基，并在树脂上修饰Pal‑γ‑Glu，再肼解去除Dde保护基，得到多肽树脂II；3）继续偶联第13位至第31位氨基酸，得到多肽树脂III，4）将多肽树脂进III行切割，把多肽从树脂上裂解下来同时去除侧链保护基得到利拉鲁肽粗品，再经高效液相色谱分离纯化、冻干后得到利拉鲁肽。本发明采用的制备利拉鲁肽的工艺方法具有操作简便、粗肽纯度高、综合收率高的特点。

主权项

一种利拉鲁肽的固相合成法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以Fmoc‑Gly‑王树脂为载体，采用Fmoc固相合成法逐一偶联第2位至第12位氨基酸，得到多肽树脂I： Dde‑Lys(mmt)‑Glu(Otbu)‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp(Boc)‑Leu‑Val‑Arg(Pbf)‑Gly‑Arg(Pbf)‑Gly‑王树脂（I）；（2）酸解去除第11位Lys侧链的mmt保护基，并在树脂上修饰Pal‑γ‑Glu，再肼解去除Dde保护基，得到多肽树脂II：NH2‑Lys(γ‑Glu‑Pal)‑Glu(Otbu)‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp(Boc)‑Leu‑Val‑Arg(Pbf)‑Gly‑Arg(Pbf)‑Gly‑王树脂（II）；（3）继续偶联第13位至第31位氨基酸，其中第20，21位氨基酸和第24，25位残基分别用假二肽片段X,Y所取代，得到多肽树脂III：His(Trt)‑Ala‑Glu(Otbu)‑Gly‑Thr(tbu)‑Phe‑Y‑Asp(Otbu)‑Val‑X‑Tyr(tbu)‑Leu‑Glu(Otbu)‑Gly‑Gln(Trt)‑Ala‑Ala‑Lys(γ‑Glu‑Pal)‑Glu(Otbu)‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp(Boc)‑Leu‑Val‑Arg(Pbf)‑Gly‑Arg(Pbf)‑Gly‑王树脂（III）X= Ser(tbu)‑Ser(psi(me,me)pro)；Y= Thr(tbu)‑Ser(psi(me,me)pro)；（4）加入裂解试剂对多肽树脂III进行裂解，将三十一肽从树脂上裂解下来并去除侧链保护基团，同时打开序列中两个个假二肽片段X,Y的五元环，得到利拉鲁肽粗品，利拉鲁肽粗品再经高效液相色谱分离纯化、冻干精制得到利拉鲁肽：NH2‑His‑Ala‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Val‑Ser‑Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly‑Gln‑Ala‑Ala‑Lys(γ‑Glu‑Pal)‑Glu‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Arg‑Gly‑Arg‑Gly‑COOH。